Bioquimica

I). INTRODUCCIÓN:
La fenolasa es una enzima muy importante y muy abundante en la naturaleza
Entre las reacciones indeseables que ocurren en las células dañadas de algunos frutos se encuentran aquéllas que involucran la oxidación de compuestos fenólicos por medio del sistema enzimático llamado Polifenoloxidasas, que dan como resultado la formación de productos finales de color característico.El sistema enzimático polifenoloxidasa es también conocido como fenolasa, tirosinasa y catecoloxidasa. La naturaleza de estas enzimas es de oxidorreductasas, se encuentran dentro del grupo de las hidroxilasas y se considera que están asociadas principalmente con los cloroplastos y otros plastos.
Un ejemplo típico es la formación de melaninas a partir de la tirosina mediante una cadena dereacciones de las cuales las dos primeras son catalizadas por una polifenoloxidasa:
La formación de las melaninas es responsable del desarrollo de la coloración negra o gris en las células dañadas del tubérculo de papa y de otros materiales vegetales.
Otros sustratos comúnes para las polifenoloxidasas son: el ácido clorogénico y el ácido paracumaril-quínico, sin embargo, los pigmentos derivados deellos no tienen colores vistosos. El color marrón de las manzanas magulladas resulta probablemente del uso de los flavanos como sustratos, mientras que en el caso de los plátanos, el principal sustrato es la dopamina y, en algunas bayas el principal sustrato lo constituyen las antocianidinas. La reacción con estas últimas conduce a la pérdida de pigmentación deseable de los frutos. La presencia delas polifenoloxidasas y sus sustratos potenciales trae como consecuencia el inevitable cambio de coloración del tejido dañado. Se ha reportado que este sistema enzimático es muy sensible al pH, de ahí que no se observen las reacciones antes mencionadas en frutos como los cítricos, ya que su pH es demasiado bajo, lo cual inhibiría a la enzima.

II. Objetivos
* Estudiar la enzima fenolasa.Esta enzima se encuentra en las células, tanto en material vegetal como animal , y es responsable del proceso de melanización en animales y del pardeo de vegetales.
* Se realiza su extracción a partir de material biológico vivo
* Se analizara la actividad de fenolhidroxilasa y polifenol oxidasa por medio de las reacciones del extracto enzimático obtenido con un sustrato exógeno añadido,atraves del producto coloreado que se obtiene en la reacción.
* Se compara con la reacción obtenida con el sustrato celular endógeno
* Se estudiara el efecto de la temperatura, el PH, de la concentración enzimática y la concentración de sustrato de la reacción.
III. Materiales y métodos
3.1. Materiales:
* Papas
* Agua destilada
* Fenol 4%
* Pipetas
* Tubos de ensayo* Vasos de precipitación
* Embudo
* Papel filtro
* Estufa
* 0,1M acido cítrico
* 0,2M fosfato disodico
3.2. Parte experimental
3.2.1. Obtencion de un extracto enzimático apartir de la papa
Cortamos en trosos pequeños la papa previamente lavada y pelada
Luego añadimos 400ml de agua destilada dejar reposar, después filtramos el contenido para extraer el almidónluego ponemos el extracto enzimático de fenolasa que utilizamos en la practica
Luego de eso colocamos el extracto en tres tubos de ensayo, llenados hasta la mitad y se marcaron con rotulador (A,B,C) y lo sobrante lo tapamos y lo guardamos en la nevera.
En el tubo A agregamos el extracto enzimático que se utiliza en condiciones normales o control, para observar reacción cuando se añade el sustratofenol exógeno.
En el tubo B se hierve a baño maría durante 15 minutos para desnaturalizar la enzima.
En el tubo C se dejara a temperatura ambiente y se agita cada cierto tiempo para oxigenar el contenido y observar la reacción que transcurre lentamente con el sustrato endógeno, es decir, el fenol que contienen células de la patata.
La reacción requerirá oxigeno por lo que es necesario agitar...