Bioquimica

ACTIYIDAD DE F'OSATASA ACIDA El\ HTGADO
I.INTRODUCCION
Aprovechando la capacidad de las enzimas de catalizar ciertas reacciones quimicas bien
definidas, se puede detectar la presencia de lasmismas en tejidos y la cantidad de las
mismas se puede estimar a partir de la velocidad de la reacci6n. De manera que se
puede medir la velocidad de reacci6n, para una enzima or particular, identificandopreviamente una t6cnica especifica pata tal fin. Esta velocidad de reacci6n se puede
expresar en Unidades de Enzima por gramo de tejido. La actividad en este caso nos
daria una medida de lacantidad de enzima presente en ese tejido.
En general las enzimas pueden encontrarse en diferentes concentraciones en los tejidos,
en las figuras se observan las diferentes proporciones de fosfatas aircida y fosfatasa
alcalina en diversos tejidos, expresadas en tdrminos de actividad enzim6tica (unidades
de enzima) por gramo de tejido.
tr. FUNDAMENTO
Se utiliza p-nitrofenol fosfato como sustrato,ya que el producto de la hidr6lisis es
f6cilmente cuantifi cable.
La reacci6n catalizada por la fosfatasa 6cida se describe en la pr6ctica anterior, la
diferencia est6 en que esta vez seutilizarhun extracto de higado como fuente de enzima.
En la actividad de fosfatasa, inicialmente se observa la liberacion de p-nitrofenol y
fosfato inorgdnico. La segunda parte ilustra la forma de detectar elp-nitrofenol
formado. Al afiadir NaOH para detener la reaccci6n, el hidroxilo reacciona con el pnitrofenol
para remover el prot6n fenolito y se genera p-nitrofenolato, el cual absorbe a
402nrn.El nivel de hidr6lisis es proporcional a la actividad presente de 1a enzima en el extracto
de higado. La actividad de la enzima se expresa en unidades de enzima (UE). Se
considera una unidad deenzima a la cantidad de enzima necesaria para producir una
micromol de producto por minuto, bajo las condiciones del ensayo
IIL MATERIALES Y METODOS
EQUIPOS Y MATERIALE,S
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Homogeni zador de tej...