bioquimica



INFORME
Laboratorio Nº 3 Cinética Enzimática


Introducción
Marco teórico
Enzimas
Catalizan reacciones químicas necesarias para la sobrevivencia celular, sin las enzimas los procesos biológicos serían tan lentos que las células no podrían existir. Las enzimas pueden actuar dentro de la célula, fuera de ésta, y en el tubo de ensayo.
Enzimas-Catalizador
Tanto la enzima como elcatalizador aceleran la velocidad de una reacción química.
Una enzima puede transformar 1000 moléculas de sustrato/ segundo
Las enzimas tienen 3 propiedades que los catalizadores NO tienen

Especificidad por el sustrato
Se inactivan por desnaturación
Pueden ser reguladas
Fosfatasas
Las fosfatasas son enzimas que actúan como catalizadores en la hidrólisis del ácido fosfórico orgánico. Puedendividirse en dos categorías: alcalinas y ácidas. Las fosfatasas alcalinas se encuentran en altas concentraciones en el hígado, los huesos en crecimiento y la placenta. Se denominan alcalinas porque existen en medios alcalinos, en contraste a las fosfatasas ácidas que existen en medios ácidos.

Actividad Enzimática
Es el número de moles de sustrato que reaccionan para formar producto, por mol deenzima y por unidad de tiempo. Esto supone que la enzima está plenamente saturada con sustrato y por tanto que la reacción se efectúa con su máxima velocidad. El índice de recambio muestra la eficiencia impresionante de la catálisis enzimática.


¿Cómo afecta el PH en una Enzima?
Efecto del Ph en la Enzima
1. Sobre la fijación del substrato al centro activo:
- Grupos disociables de laenzima
- Grupos disociables del substrato
2. Sobre la transformación catalítica del substrato
3. Sobre la estructura de la proteína enzimática

Cada enzima tiene un pH óptimo para su actividad.El pH afecta las interacciones iónicas

PH Optimo
El pH optimo de una enzima es el valor de pH en el cual esa enzima desempeña de mejor manera sus funciones (o sea, a ese pH trabaja mejor que acualquier otro pH).
Cada enzima tiene su propio pH optimo ejemplo las enzimas del estomago (pepsina, por ejemplo) trabajan mejor a pH acido (ph=2 aprox.), mientras que las enzimas de la saliva (amilasa, por ejemplo) cumplen mejor su función a un pH cercano a 7.

Ecuación de Velocidad
La velocidad de reacción enzimática puede ser calculada por medio de la siguiente ecuación.

A = absorbancia delproducto.
ε · l = pendiente curva de calibrado.
t = tiempo (minutos). Es el tiempo desde que se agrega enzima hasta que se detiene la reacción.
V = volumen de ensayo (ml). Todo lo que tiene el tubo sin considerar el stopper, (molécula que detiene la actividad enzimática y cambia el pH del medio).
v = volumen de enzima (ml). Cantidad de enzima que agrego.
fd = factor dilución en el ensayoenzimático (en ensayos discontinuos). Volumen final del tubo dividido por volumen inicial.
fe = factor de dilución de la enzima previo al ensayo enzimático.


1. Objetivos:
2. Determinar el efecto que tiene el PH sobre la enzima.
3. Calcular la Velocidad de Reacción enzimática en solución de PH.
4. Graficar la Velocidad v/s PH.
5. Determinar PH óptimo.
Preparación del experimento
Preparar 5tubos con 0.4 ml de sustrato (paranitrofenolfosfato), a todos los tubos agregar 2 ml de tampón ( 3-6-8-5-11), luego 1.6 de agua a todos y agregar la enzima 1 ml por tubo, llevar a temperatura y luego analizar.

6-Fundamento de las Técnicas:
Métodos de Ensayos Enzimáticos
La propiedad característica de las enzimas es catalizar reacciones específicas. Su presencia se detecta por la realizaciónde dichas reacciones. La cantidad y concentración de enzima presente en una solución se estima por la velocidad de la reacción catalizada. Es por ello que la medida de velocidad es esencial en la investigación de enzimas y para ello se requiere de métodos confiables y reproducibles.
Si se ha alcanzado el estado estacionario, la actividad de una enzima puede estudiarse por la velocidad de...