Bioquimica

RESULTADOS Y ANÁLISIS DE DATOS

Para estudiar y verificar la actividad enzimática de la peroxidasa como catalizadora de reacciones de oxidación, se realizan diversos controles con el fin de demostrar que la reacción se lleva a cabo por el efecto de la enzima. Se comienza por preparar el medio de incubación el cual debe contener 3mL, siendo éstos completados por un cierto volumen decitrato de sodio 0,5M a pH=5, guayacol (sustrato) 50mM, H2O2 3%, 2mL del extracto de rábano y agua destilada. Para determinar las cantidades volumétricas correspondientes a cada componente en la incubación, se utiliza la fórmula de dilución C1*V1=C2*V2, con la cual se deduce que se necesitan 0,3mL de cada compuesto antes descritos, 0,2mL de extracto de rábano, y el resto del volumen se completa conagua destilada.

Los ensayos se realizan agregando los 3mL del medio de incubación a tubos de ensayo y observando el cambio de coloración de la solución a través del tiempo. Los primeros controles corresponden al control enzimático, control no enzimático y al control enzima hervida los cuales se resumen en la siguiente tabla:

Tabla I. Composición de los medios de incubación.|Reactivos |Tubo 1 [Control enzimático] |Tubo 2 [control no enzimático] |Tubo 3 [control enzima hervida] |
|Extracto de rábano |0,2mL |---------- |0,2mL |
|Guayacol 0,05M |0,3mL |0,3mL|0,3mL |
|H2O2 3% |0,3mL |0,3mL |0,3mL |
|Citrato de Sodio 0,5M a pH=5 |0,3mL |0,3mL |0,3mL |
|Agua Destilada |1,9mL|2,1mL |1,9mL |


En la siguiente tabla, se describe la intensidad de color a través del tiempo para los ensayos anteriores:

O= Sin color; X= Presencia de color

Tabla II. Variación del color a través del tiempo

| |Intensidad Color |
|Tiempo[s] |Tubo 1 |Tubo 2 |Tubo 3 |
|0 |O |O |O |
|5 |X |O |O |
|10 |XX |O|O |
|15 |XXX |O |O |
|20 |XXX |O |O |
|25 |XXX |O |O |
|30 |XXX|O |O |
|35 |XXX |O |O |
|40 |XXX |O |O |
|45 |XXX |O |O|
|50 |XXX |O |O |
|55 |XXXX |O |O |
|60 |XXXX |O |O |


En el tubo 1, correspondiente al control...