bioquimica





INFORME LABORATORIO Nº1:

ESPECTROFOTOMETRÍA

03/04/2014

CONILL, FLAVIA M.

INTEGRANTES DEL GRUPO:
BOZZOLO, Carolina
CONILL, Flavia
MONTENEGRO, Elizabet
SOTO, Jesica




INFORME DE LABORATORIO
TEMA: “ESPECTROFOTOMETRÌA”
INTRODUCCIÓN:

Llamamos espectrofotometría a la serie de prácticas analíticas basada en la interacción de las moléculas y las radiacioneselectromagnéticas. Es decir, a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda.
Definiendo una radiación electromagnética como una onda propagándose en el espacio, o como un flujo de partículas llamadas fotones, tenemos en cuenta para la interpretación de esta técnica,el concepto de longitud de onda: distancia entre dos máximos consecutivos de la onda.
Fundamento de la espectrofotometría: se basa en el estado energético de una molécula y su alteración por la absorción de radiación electromagnética a determinada longitud de onda, lo cual se puede medir para realizar un estudio cualitativo o cuantitativo, siendo este último, su fin práctico para una posteriorinterpretación de la sustancia analizada.
Para ello se utiliza el espectrofotómetro, dispositivo experimental con el que se llevan a cabo las distintas mediciones necesarias, trabajando con los conceptos de Absorbancia y Transmitancia:
1. TRANSMITANCIA: Relación entre la radiación transmitida i, y la intensidad luminosa incidente I, multiplicada por 100:


2. ABSORVANCIA: Medida dela cantidad de Energía luminosa incidente absorbida por una sustancia en solución. Relacionada con Transmitancia:


El medio matemático para expresar cómo la materia absorbe la luz, está dado por la Ley de Lambert y Beer. Esta ley expresa que la absorbancia de una solución es directamente proporcional al camino recorrido por laradiación electromagnética y a la concentración de la solución. Es decir: la cantidad de luz que sale de una muestra es disminuida por tres fenómenos físicos: La cantidad de material de absorción en su trayectoria; La distancia que la luz debe atravesar a través de la muestra; y la Probabilidad de que el fotón de esa amplitud particular de onda sea absorbida por el material.
Esta relación puedeser expresada como:
A= a.b.c
A: Absorbancia.
a: Absortividad específica de cada soluto.
b: Distancia recorrida por el haz de luz en cm.
c: Concentración de la solución

Para aplicar esta ley, existen ciertos requerimientos: Realizar la medición del porcentaje detransmitancia con luz monocromática; realizarla a una región de absorción del componente a estudiar; elegir una referencia que cumpla: C=0 cuando T=100% o A=0%; y que la naturaleza de la solución sea tal que su transmisión responda a variaciones de C.

OBJETIVOS DE LA EXPERIENCIA:
Aprender el uso del espectrofotómetro
Realizar espectro de absorción de sustancias puras: soluciones de azul demetileno.
Realizar una curva de calibración para determinar la concentración de una muestra problema de azul de metileno.


1º Actividad: Espectro de absorción de solución de azul de metileno.
Materiales utilizados:
Solución de azul de metileno de 5mg/L.
Agua destilada
2 Cubetas
Observamos el procedimiento para utilizar el espectrofotómetro, determinando cada parte del mismo,determinando la ubicación del cuerpo negro. Colocamos en una de las cubetas una pequeña cantidad de solución de azul de metileno, y en otra, agua destilada, tomándolas con precaución en los lados rugosos de las mismas para no interrumpir el paso de luz a través de ellas. Luego comenzamos con la lectura posicionando en el lugar indicado, siempre llevando a cero de absorbancia antes de cada lectura. Medimos...