bioquimica

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

INTRODUCCIÓN
La cuantificación de proteínas es la encargada de entregarnos una determinada concentración en un tipo de muestra. Esta se realiza cuando se hace una purificación de proteínas, como objetivo nos permite conocer la actividad especifica y diagnostico de enfermedades.

-La espectrometría: es el estudio de la interacción entre la radiaciónelectromagnética y la materia, con absorción o emisión de energía radiante. Se basa en la ley Lambert Beer, la cual relaciona la absorción de luz con las propiedades del material atravesado.

- Métodos de cuantificación de proteínas: Los métodos que se utilizan no siempre son satisfactorios, al momento de elegir el método deben tener en cuenta las siguientes características; la naturaleza de laproteína, de los otros componentes, de la rapidez y sensibilidad deseada. Algunos de los métodos que se utilizan comúnmente son:


Método de Biuret: se trata de los componentes a estudiar que tengan dos o más uniones pepetidicas, ejemplos de estos serían tetrapepetidos, polipéptidos y proteínas. Éstos dan un color purpura connotado que se tratan con solución de sulfato de cobre diluida.

Métodode Bradford: este método esta basado en el cambio de color del colorante coomassie brilliant blue G 250 en respuesta a diferentes concentraciones de proteínas. Este compuesto interacciona con aminoácidos básicos, como la arginina y aromáticos.

Método de acido bicinconinico (BCA): el reactivo de ensayo BCA, se une al cobre reducido, formando un complejo ternario en un medio alcalino, con unaelevada sensibilidad y selectividad en la detección calometrica, de esta forma la quelacion de un ion cobre por dos moléculas de BCA, dará como resultado el complejo de color purpura, el cual es soluble en agua y exhibe a una mayor absorbancia a 562 nanómetros.

-Método de Lowry: es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de proteínas, que se basa en la Ley lamber beer “lo cual relacionala absorción de luz con las propiedades del material atravesado”, aquí es cuando utilizaremos la espectroscopia. Existen dos etapas de este método, las cuales son:










Reacción previa con la proteína en un medio alcalino con iones cu2+: Los iones cu2+ presentes en el radioactivo de cobre alcalino, se unen con las proteínas formando un complejo con los átomos de nitrógenosen los enlaces peptídicos. El complejo cu2+-proteína arroja un color azul claro, provocando desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína, exponiendo los residuos fenolitos de la tirosina que se unen a participar en la siguiente etapa.

Reacción de reducción del reactivo folin-ciocalcateu: ocurre en un medio alcalino al oxidarse los grupos fenolitos de los residuos de tirosina,actuando el cobre como catalizador.
El principal constituyente del reactivo, es el acido fosfomolibdofungtico, característico por arrojar un color amarillo que al ser residuo por los grupos fenolitos da lugar a un complejo de azul intenso.





OBJETIVOS
- Conocer como se aplica la espectrometría.
- Como se aplica la ley de lambert Beer en los métodos de cuantificación de proteínas.
-Como se aplica el método de lowry en especial.























MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales:

-Tubos de ensayos.
-Gradilla.
-Pro pipetas.
-Pipetas.
-Vaso precipitado.
-Reactivo de Cobre Alcalino (RCA).
-Albúmina de Suero de Bovino (BSA).
-Agua.
-Reactivo de Folín.
-Celdas o cubetas.

Métodos a realizar:

-Rotular los tubos de ensayos desde el 0 al 5y un 7 de Muestra Problema (MP).
-Agregar la solución de proteína (BSA ó MP de un volumen de 0.4 mg/ml), se agrego al tubo 1(0.1 ml), al tubo 2(0.2 ml), al tubo 3 (0.3 ml), al tubo 4 (0.4 ml), al tubo 5 (0.5 ml) y al tubo MP (0.5 ml).
-Agregar agua se agrego al tubo 0 (1.0 ml), al tubo 1 (0.9 ml), al tubo 2 (0.8 ml), al tubo 3 (0.7 ml), al tubo 4 (0.6 ml), al tubo 5 (0.5 ml), al tubo de MP...