bioquimica

Fosfatasas Acida
Prostática cinética
Método cinético a 405 nm para la determinación de fosfatasa ácida prostática en suero. Sustrato: α-naftil fosfato

SIGNIFICACION CLINICA
Las fosfatasas ácidas se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente altas
las cantidades de estas enzimas en próstata, estómago, hígado, músculo, bazo, eritrocitos y plaquetas.Las distintas isoenzimas se diferencian entre sí por su pH
óptimo, peso molecular, y requerimientos de activadores e
inhibidores.
La fosfatasa ácida prostática (FAcP) constituye un valioso
auxiliar en el diagnóstico precoz de cáncer prostático, una
de las formas neoplásicas de mayor morbilidad.
La determinación cinética de FAcP usando α-naftil fosfato
como sustrato ha mostrado sensibilidady especificidad comparables a las técnicas radioinmunológicas, con similar poder discriminatorio y evidentes ventajas de orden práctico.
FUNDAMENTOS DEL METODO
La FAcP (E.C.3.1.3.2.) hidroliza el α-naftil fosfato a pH 5,2
con liberación de fosfato y α-naftol. El naftol reacciona a su
vez con un diazorreactivo presente en el sistema 4-clorotolueno-1,5-diazo α-naftaléndisulfonato (4-CTD)produciendo
un pigmento amarillo, de modo que el aumento de la absorbancia leído a 405 nm es proporcional a la actividad fosfatásica de la muestra.
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: comprimidos conteniendo cada uno 6 umol
de α-naftil fosfato (NF) y 2 umol de 4-CTD.
B. Reactivo B: buffer citrato 0,1 mol/l con 14 mmol/l de activador (1,5-pentanodiol + butanol).
Concentraciones finales
NF......................................................................... 3 mmol/l
4-CTD .................................................................... 1 mmol/l
buffer citrato ............................................... 0,1 mol/l, pH 5,2
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivo A; preparación: para cada determinación disolver
un comprimido de Reactivo A en 2 ml de Reactivo B, agitando
suavementehasta lograr disolución completa.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de química clínica.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
acuerdo a la normativa local vigente.

ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: son estables enrefrigerador (2-10oC)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. La exposición prolongada a temperatura ambiente puede deteriorar el
Reactivo A.
Reactivo A reconstituido: estable 24 horas refrigerado (210oC) o 12 horas a temperatura ambiente.
INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
REACTIVOS
Lecturas a 405 nm del Reactivo A reconstituido mayores de
0,250 D.O. leídas contra agua,son indicio de deterioro de los
reactivos. En tal caso desechar.
MUESTRA
Suero
a) Recolección: obtener suero libre de hemólisis. No utilizar
plasma. La fosfatasa ácida prostática es sumamente inestable “in vitro” y al pH del suero a temperatura ambiente puede
perderse hasta un 50% de actividad en pocas horas. Por lo
tanto debe separarse el suero del coágulo dentro de una hora
de laextracción, conservándolo refrigerado hasta el momento
de usar.
b) Aditivos: para evitar la inactivación durante el almacenamiento puede acidificarse la muestra agregando 20 ul de buffer acetato, 5 M, pH 5 por cada ml de suero. Este conservador se prepara agregando hidróxido de sodio concentrado a
29 ml de ácido acético glacial p.a. hasta obtener pH 5 completando a 100 ml con agua destilada.
c)Sustancias interferentes conocidas:
- sueros con intensa ictericia muestran baja recuperación de
la actividad enzimática por lo que su uso debe evitarse.
- no usar sueros con hemólisis visibles.
- los anticoagulantes interfieren en la reacción por lo que no
debe emplearse plasma en la determinación.
Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
drogas en el presente método.
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