Bioquimica

Universidad Autónoma de Coahuila
Facultad de Ciencias Químicas

Laboratorio de Bioquímica


Practica 6 pruebas para la identificación de aminoácidos

Objetivo: realizar las pruebas de laboratorio que permitan el estudio de las propiedades fisicoquímicas de aminoácidos y proteínas, así como su identificación.
Introducción:
Las proteínas son macromoléculas de elevado peso molecular, yaque su estructura consta de cadenas de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos entre un grupo alfa-carboxilo de un aminoácido y el grupo alfa amino del otro. Aunque en la naturaleza existen más de 300 aminoácidos, en las proteínas solo se encuentran 20 que difieren en su tamaño, forma, carga, capacidad de formar puentes de hidrogeno o disulfuro y reactividad química. Las múltiples probabilidadesde combinación de los veinte aminoácidos en las cadenas peptídicas, permiten la gran diversidad de las funciones proteicas. La presencia de grupos químicos ionizados en los aminoácidos permite a las proteínas presentar características fisicoquímicas específicas en el microambiente biológico. De ahí la importancia de su estudio. El objetivo de esta práctica es realizar las pruebas de laboratorio quepermitan el estudio de las propiedades fisicoquímicas de aminoácidos y proteínas, así como su identificación.

Material y reactivos:
* Parrilla de calentamiento eléctrica
* Matraces erlenmeyer de 125 ml
* Tubos de ensaye 13 x 100
* Pipetas de 1,5,10 ml
* Baño María
* Gradilla

* Solución de Ninhidrina al 0.2%
* Reactivo Biuret

* Solución de Glicina al1%
* Solución de Fenilalanina al 1%
* Solución de Triptofano o triosina al 1%
* Solución de albumina de suero bovino al 2%

* Hidróxido de sodio al 40%
* Hidróxido de sodio al 10%
* Acido nítrico concentrado
* Acido sulfúrico concentrado
* Tartrato de sodio y potasio tetrahidratado
* Sulfato de cobre pentahidratado
* Yoduro de potasio
* Etanol al 95%Preparar los reactivos como se indica:
Solución de Ninhidrina al 0.2%: disolver 0.2g de Ninhidrina en 10ml de etanol al 95% y completar a 100ml con agua destilada.
Reactivo Biuret: disolver en 25ml de agua destilada 0.75g de sulfato de cobre, 3g de tartrato de sodio y potasio tetrahidratado y 0.5g de yoduro de potasio (KI). Añadir con agitación constante 150ml de hidróxido de sodio al 10%diluir hasta 500ml con agua destilada y mezclar.
Procedimiento:
Prueba de la Ninhidrina
Fundamento: la Ninhidrina reacciona específicamente con el grupo alfa-amino de los aminoácidos ya sean libres o bien unidos mediante enlace peptídico. la Ninhidrina a un pH entre 4 y 8 es un oxidante muy fuerte y siempre reacciona con los grupos alfa amino para dar un compuesto coloreado que varia del azulvioleta al purpura. Esta reacción también se conoce como condensación de la Ninhidrina.
Método:
1. Enumerar 3 tubo de ensayo
2. En el tubo 1 colocar 1ml de agua destilada (blanco.)
3. En el tubo 2 colocar 1ml de la solución de Glicina al 1% (o cualquier otro aminoácido)
4. En el tubo 3 colocar un ml de la solución de albumina de suero bovino al 2%.
5. Agregar a cada tubo 0.5ml desolución de Ninhidrina al 0.2%
6. Mezclar y colocar en baño María durante 5 min
7. Observar y registrar sus resultados

Prueba de Biuret
Fundamento: la prueba llamada Biuret nos sirve para investigar la presencia de enlaces peptídicos, unión especifica entre los aminoácidos de las proteínas. Se basa en la formación de sales complejas de color violáceo al añadir sulfato cúprico ensolución alcalina. El complejo está formado por enlaces de coordinación, donde los pares electrónicos proceden de los grupos amino de los aminoácidos de la cadena polipeptidica.
Método:
1. Enumerar 3 tubos de ensayo
2. En el tubo 1 colocar 2ml de agua destilada (blanco).
3. En el tubo 2 colocar 2ml de la solución de Fenilalanina al 1% (u otro aminoácido)
4. En el tubo 3 colocar 2ml de...