bioquimica

Antecedentes:
La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla al hacerla pasar a través de un adsorbente, es decir, las sustancias de la mezcla se adhieren a una superficie. Tiene la particularidad de que una de las fases permanece estacionaria, mientras que las otras se mueven o son impulsadas (fase móvil). Los componentes de la mezcla se separandebido a que cada uno manifiesta diferentes afinidades por el solvente, estas pueden estar basadas en carga positiva o negativa, hidrofobicidad, afinidad o tamaño de las partículas.
Si uno de los componentes de la mezcla presenta propiedades químicas muy similares a la fase móvil tendrá gran movilidad, es decir, el efecto de retención que provocaría la fase estacionaria sería nulo. Lo contrariosucedería con un componente de la mezcla que tenga una gran afinidad con la fase estacionaria. Por lo tanto, la técnica se basa en la velocidad de desplazamiento diferencial de los solutos al ser arrastrados por una fase móvil sobre una estacionaria. Esta diferencia será la que nos permita identificar cuantos componentes tiene una disolución y cómo separarlos.
Durante el desarrollo de lasactividades de laboratorio, la cromatografía usada fue la de papel, esta es la más sencilla de las técnicas, pero sólo nos dará resultados cualitativos. Está casi en desuso. El método se basa en un mecanismo de reparto,
y consiste en depositar una pequeña cantidad de muestra en el extremo de una tira de papel de filtro, que se deja evaporar. Luego se introduce la tira en una cubeta que contenga eldisolvente, de manera que éste fluya por la tira por capilaridad.
Cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo, se retira el papel y seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se verán las manchas de distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado.
Las sustancias no polares,también se pueden separar cubriendo el papel con compuestos no polares y utilizando disolventes polares como fase móvil.
Hay varios factores de los cuales depende una cromatografía eficaz: la elección del disolvente y la del papel de filtro.
Para la identificación de las manchas de aminoácidos veremos los contornos de las manchas así «reveladas» se señalan con lápiz y constituyen la referencia parala identificación de las sustancias aisladas. Como medida en cromatografía sobre papel se emplea el Rf (del inglés: Retention factor).
Se define como el cociente de dividir el recorrido de la sustancia por el del disolvente, o sea la distancia que media desde el origen hasta el centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media desde el origen hasta el frente del disolvente (S). Rf =X/S.

Para saber la migración de cada uno de los aminoácidos, necesitamos saber su tipo de polaridad:
AMINOACIDOS APOLARES: que se caracterizan porque su –R es una cadena alifática. Debido la naturaleza alifática en el –R no se generan zonas electronegativas o electropositivas. Cuando forman parte de las proteínas esos – R tienden a alejarse del medio acuoso e interaccionar entre sí en zonasinternas de la molécula. Los aminoácidos presenten en este grupo son:
Leucina, Alanina, triptófano.

AMINOACIDOS POLARES CON CARGA: presentan un grupo adicional ácido o base en el - R. Los aminoácidos ácidos, (aspartato y el glutamato) tienen grupos - R cargados negativamente a pH 7.0por la presencia del grupo -COOH en el radical. A su vez los aminoácidos básicos, que contienen uno o más –NH2 enel radical, tienen - R cargados positivamente a pH 7.0. Dentro de esta categoría también se encuentra incluida la Arginina.
El fundamento de la separación implica que los aminoácidos cuya cadena lateral (R) tenga un carácter más apolar, tendrán tendencia a desplazarse con la fase móvil, mientras que los aminoácidos que sean polares, ya sean con carga o sin carga, serán retenidos por la fase...