Bioquimica

peroxidasa y polifenol oxidasa
INTRODUCCIÓN

La peroxidasa es una homoproteína altamente específica para el aceptor de hidrogeno, que es el peroxido de hidrogeno, pero es muy inespecífica en cuanto al sustrato donador que utiliza, que puede ser una de muchas sustancias, por ejemplo: fenoles, aminofenoles diaminas, indofenoles, leucocolorantes, ascorbato e incluso ciertos aminoácidos comotirosina.
La reacción se puede seguir de la siguiente manera:
Donador reducido + H2O2 peroxidasa donador oxidado + 2H2O
Esta enzima se encuentra en la mayoría de las plantas y en ciertos microorganismos, pero es escasa en los tejidos animales. Se observa la actividad de la peroxidasa en la leche (lactoperoxidasa), en los leucocitos (leucoperoxidasa) o mieloperoxidasa), en la placenta una de las formasmás activas en la peroxidasa del rábano.
El mecanismo de acción es sumamente parecido al que se propone para la catalasa, a través de la formación de un complejo. Más aun, en este caso son diversos los complejos los complejos que se forman entre la enzima y el peroxido de hidrogeno de que sea capaz de reaccionar con el donador reducido.
La polifenol oxidasa recibe muchos nombres debido a la grandiversidad de sustratos que emplea. Técnicamente es una o-difenol: oxigeno reductasa. Su reacción se puede describir de la siguiente manara:
2 o- difenol + O2 polifenol oxidasa 2O-quinona + 2 H2O
Esta enzima puede llevar a cabo la oxidación directa aerobia de compuestos mono y difenoles (tirosina, fenol, p-cresol, 3, a-dimetil fenol, 4-terbutilfenol). También puede atacar a o-difenoles y a laadrenalina. Es una enzima de peso molecular 120.00, con un centro de cobre.
La polifenol oxidasa de la papa ataca a los siguientes compuestos en orden de mayor a menor actividad: acido clorhídrico, catecol, quercitina, piragalol, acido cafeico, 3,4-dihidroxifenilalanina, p-creso, tirosina entre otros. Las quinonas resultantes de la reacción de la polifenol oxidasa pueden continuar oxidándose ypolimerizándose, para dar compuestos finales que son muy complejos y coloridos.
Es difícil distinguir las actividades de las dos enzimas a partir de la misma fuente, ya que pueden atacar a los mismos substratos. De Sin embargo utilizando papa como fuente de las enzimas, la reacción de la peroxidasa es mucho mas rápida, cosa que puede permitir la observación de las dos acciones 1

OBJETIVO
Demostrar las dosactividades enzimáticas, peroxidasa y Polifenol oxidasa, a partir de un extracto de papa.

MATERIALES Y REACTIVOS

Material necesario.
1 Gradilla 1 Mortero
15 tubos de ensaye de 13 x 100 1 vaso de precipitado de 500 mL
2 vasos de precipitados de 250 ml 1 Agitador
Pipeta de 5 ml y 3 de 1 ml. 1 Mechero, tripie y tela de asbestos
1 Pinzas para tubo de ensaye 1 gasa
1 Pelador
Hielo

Reactivos
25 mL deCatecol al 1%
25 mL Pirogalol al 1%
4 mL Tirosina al 1%
35 mL Peroxido de hidrogeno al 3%
8 gotas Cianuro de sodio
10 mL de agua destilada.
10 mL Exacto de papa precalentado y frio 40 mL

PROCEDIMIENTO

“Lo indicado en este punto debe hacerse lo más rápido posible”
Una papa limpia se rallo, molió en un mortero. Al mortero le pusimos hielo y 100 ml agua destilada. Se dejo reposar por 10 min. Sefiltro a un vaso de precipitados que estaba sumergido en el hielo, la pulpa que quedo en la gasa y se desecho. Dejamos reposar el filtrado por 5 minutos para que el almidón se asiente en el fondo, después volvimos a decantar y el nuevo filtrado lo colocamos en hielo. Este liquido filtrado le llamamos “Extracto de papa”. Obtuvimos más de 50 ml. Después en una gradilla colocamos 13 tubos y losenumeramos del 1 al 13. Se coloco 0.5 ml de catecol al 1 % a los 1, 2, 3, 4, 11.

Después colocamos 0.5 ml pirogalol al 1 % 5, 6, 7, 8, 12. Luego colocamos 2 ml de tirosina al 1 % a los tubos 9 y 10. Después le pusimos 0.5 ml de peróxido de hidrógeno al 3 % a los tubos 2, 4, 6, 8, 10, 11, 12. Se agrego 4 gotas de cianuro de sodio al 5% a los tubos 7 y 8. Tomamos 5 ml del extracto de papa y los...