bioquimica

Reyna
Caracterización bioquímica de la transialidasa TS1 variantes del Tripanosoma congolense
Introducción
La transialidasa es una enzima clave que participa en invasión, y le permite al parásito que transmite la enfermedad defenderse del sistema inmunitario.
La transialidasa es manifestada por tripanosomas y juegan un papel importante en el ciclo de infección de insectos y mamíferos. Eneste caso las variantes del tripanosoma congolense se encuentra en áfrica y produce la enfermedad del sueño en humanos y nagana en el ganado.
Entonces la identificación y caracterización de todo esto nos abrió nuevas perspectivas para investigar el papel biológico de estas enzimas en nagana y enfermedad del sueño.
Objetivo
Reportar la clonación de transialidasa de 11 variantes de tripanosamacongolense y su expresión recombinante en células CHO.
Por otra parte las propiedades enzimáticas de que 2 de estas variantes se compararon con TS de Tripanosoma cruzi.
Mer
Antecedentes
Tripanosomiasis: Es una enfermedad de origen africano, causada por las subespecies de Tripanosoma congolense, llamada “enfermedad del sueño” en los seres humanos y “Nagana” en el ganado.
En los animalessalvajes provocan infecciones moderadas, mientras que en los animales domésticos estas provocan una enfermedad severa y a menudo fatal.
Los tripanosomas carecen de metabolismo bioquímico para sintetizar los ácidos siálicos, por lo que usan una única enzima, TS (trans-sialidase), para transferir Sia sobre las moléculas de la superficie de los parásitos.
El conocimiento actual sobre las enzimascorrespondiente a los tripanosomas africanos es muy limitado, sin embargo se cree que la sililación en las superficies de los parásitos, los protegen de la acción de las enzimas glicolíticas. Se a demostrado que TS aumenta su supervivencia y su maduración cuando se encuentra en el intestino medio del vector.
Dos formas de TS, llamadas TS-forma 1 y TS-forma 2, se han purificado de los cultivosprocíclicos de T. congolense. Curiosamente, el ácido glutámico y la proteína rica en alanina (GARP) se co-purifican con TS-forma 1, mientras que la actividad SA se encuentra predominantemente en las preparaciones de TS-forma 2.
Un anticuerpo anti-T. congolense se ha desarrollado utilizando TS-forma 1como antígeno.
Resultados
Para producir una proteína recombinante para la caracterización de la encima,el ADN que codifica los aminoácidos 17 a 732 se amplificó utilizando el ADN genómico del T. congolense como plantilla y se insertó en un vector que se manifiesta en mamíferos .
La mayoría de los aminoácidos relevantes para la actividad del TS son idénticos en todos los T. congolense. Cerca del sitio catalítico en la posición 407 se produce una serina en lugar dearginina. Curiosamente, las mismasdiferencias se producen también en T. brucei. Puesto que estos aminoácidos están cerca del sitio activo, pueden influir en la especificidad de unión del receptor.


pia
Debe tenerse en cuenta que todos estos están en el mismo
lado de la proteína como el sitio catalítico. Lo llamativo es un clus -
ter de variaciones de aminoácidos en el dominio de lectina (posición
ción 599 a 602 y 643 ),lo que sugiere que estos cambios
puede influir en la unión de sustrato, de sustrato más grande a
moléculas , tales como glicoproteínas .

Caracterización de los T. congolense TS1 en la actividad de la enzima
Los once productos génicos TS1( TS1a - TS1j )
se expresan como proteínas recombinantes y fueron reconocidos
por el anti -T. congolense
Anticuerpo TS ( mAb 7/23 ) [ 6 ]
( datos nomostrados ) . Para todas las variantes TS1 TS similares
se pudo determinar una fuerte actividad , a excepción de TS1g . Esta variante, que lleva cisteína en lugar de arginina en la posición
ción 144 , sólo tenía una muy baja actividad TS . Sin embargo , en
contraste con las otras variantes , TS1g publicado libre a Sia
de fetuina en aproximadamente 50 % de la transferencia a la lactosa ....