bioquimica

CINETICA ENZIMATICA
Waldys Nayn Moreno, Marisol Vargas, María Gómez Suarez
Ingeniería de Alimentos, Bioquímica, Universidad del Quindío

1. RESUMEN
En este trabajo se demostró la actividad catalítica de la pectinestearasa determinado por el número de mili- equivalentes éster hidrolizados.
En el trabajo se hicieron dos ensayos, uno con extracto de pulpa de fruta (maracuyá y granadilla) y elotro con extracto de enzima, básicamente consistió en preparar una muestra de cada una (extracto de enzima y extracto enzimático de pulpa de fruta) utilizando agua destilada como disolvente para la enzima y cloruro de sodio 2M para el extracto de pulpa, para este caso se ajustó el pH a 7,5 con una solución de hidróxido de sodio y se mantuvo la muestra en agitación constante durante una hora atemperatura de 4ºC (baño de agua con hielo). Luego se mezcló cada una de las muestras en partes iguales con una solución de pectina cítrica al 1% diluida en cloruro de sodio 2M. Se tomaron 5 tubos de ensayo para cada prueba, se adiciono en cada uno de ellos una proporción de la muestras y se hizo titulación con hidróxido de sodio 0,0004N utilizando como indicador fenolftaleína.
Palabras claves:actividad catalítica, pectinestearasa, extracto, enzima, solución, titulación.
ABSTRAC
In this work, the catalytic activity of the pectinestearasa determined by the number of mill equivalents hydrolyzed ester was demonstrated.
At work two trials, one with pulp extract of fruit (passion fruit and passionflower) and the other with enzyme extract were basically was to prepare a sample of each (enzymeextract and enzyme extract of fruit pulp) using distilled water as solvent for the enzyme and 2M sodium chloride to the extract of pulp, in this case the pH was adjusted to 7.5 with sodium hydroxide solution and the sample was kept under constant stirring for one hour at temperatures 4 ° C (ice water bath). Then mixed each of the samples with equal parts citrus pectin solution diluted in 1% 2Msodium chloride. 5 test tubes were taken for each test, was added into each a proportion of the samples and titration was made with 0.0004 N sodium hydroxide using phenolphthalein as indicator.
Keywords: catalytic activity, pectinestearasa, abstract, enzyme solution titration.

2. INTRODUCCION
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones químicas que son catalizadas por lasenzimas. El estudio de la cinética y de la dinámica química de una enzima permite explicar los detalles de su mecanismo catalítico, su papel en el metabolismo, cómo es controlada su actividad en la célula y cómo puede ser inhibida su actividad por fármacos o venenos o potenciada por otro tipo de moléculas.
Las enzimas, en su mayoría, proteínas con la capacidad de manipular otras moléculas,denominadas sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al centro catalítico de la enzima que lo reconozca y transformarse en un producto a lo largo de una serie de pasos denominados mecanismo enzimático. Algunas enzimas pueden unir varios sustratos diferentes y/o liberar diversos productos, como es el caso de las proteasas al romper una proteína en dos polipéptidos. En otros casos, se produce la uniónsimultánea de dos sustratos, como en el caso de la ADN polimerasa, que es capaz de incorporar un nucleótido (sustrato 1) a una hebra de ADN (sustrato 2). Aunque todos estos mecanismos suelen seguir una compleja serie de pasos, también suelen presentar una etapa limitante que determina la velocidad final de toda la reacción. Esta etapa limitante puede consistir en una reacción química o en un cambioconformacional de la enzima o del sustrato.
La actividad enzimática se ve afectada entre otros factores, por la concentración de sustrato inicial en la reacción [S]inicial. La constante de Michaelis-Menten (Km) se define como la concentración de sustrato para la cual la velocidad de reacción es la mitad de la velocidad máxima (Vmáx). Permite conocer la concentración mínima de sustrato a la que hay...