Bioquimica

I. INTRODUCCION:


Las enzimas que operan su máxima velocidad no reaccionan por un incremento en la concentración de sustratos, sino solo una disminución drástica en la concentración del mismo. Para la mayor parte de las enzimas, por consiguiente, la concentración intracelular promedio de su sustrato tiende a acercarse al valor del Km, de modo que los cambios en la concentración delsustrato generan una correspondiente modificación en el flujo de meta bolito. Las respuestas a los cambios en la concentración de sustratos representan un medio importante pero pasivo para coordinar el flujo de meta bolito y mantener la homeostasis en las células quiescentes. Sin embargo ofrecen un alcancen limitado para responder a cambios en las variables ambientales.


II.OBJETIVOS:


• la presente práctica tiene como objetivo estudiar la influencia de la concentración del sustrato sobre la velocidad de una reacción enzimática, para lo cual se utilizara la enzima glucosa oxidasa.


• Encontrar el Km o constante de MICHAELIS-MENTEN basándonos en los datos que obtendremos de forma experimental.



III. FUNDAMENTO TEORICO:

En lasreacciones no catalizadas, la velocidad de reacción es proporcional a la concentración de cada uno de los reactantes. Esto es consistente con el hecho de que la velocidad de colisión entre los reactantes es proporcional a la concentración de cada uno de ellos. Las reacciones catalizadas por enzimas son algo diferente. Cuando se mide el efecto de la concentración del sustrato de la velocidad dereacción, en presencia de una cantidad constante de enzimas, se encuentran que a muy bajas concentraciones de sustrato, cantidades incrementadas de este, causan velocidades marcadamente incrementadas.

Mediciones cuantitativas de la actividad enzimática, son necesarias para comprender su función biológica y para determinar la cantidad presenten muestras biológicas. Una descripción cuantitativa completaes compleja desde el punto de vista matemático, a causa de los muchos pasos intermediarios en una reacción enzimática, pero pueden hacerse simplificaciones útiles. Una de las más efectivas es asumir que solo los sustratos y no los productos están presentes, de modo que la reacción trascurre solo en una dirección. Bajo este supuesto, se pueden hacer estimaciones de la velocidad máxima (V.max.)alcanzables por velocidades máximas de enzimas y las concentraciones de sustrato para conseguir la mitad de esta velocidad máxima.

Esta concentración se conoce como la constante de Michaelis Menten (Km) para la enzima.
El conocimientote la constante de Michaelis Mentones útil para determinar cuanto sustrato habrá de agregarse cuando se desea medir una enzima y lo que es mas importante, es unaguía para determinar cuan efectivamente una enzima particular este funcionando en los tejidos de un organismo vivo. Este es uno de los parámetros que frecuentemente se determinan en las enzimas.

Constante de Michaelis
Constante de Michaelis (también llamada Km) Corresponde a la concentración de sustrato con la cual la velocidad de reacción alcanza un valor igual a la mitad de la máxima. Encondiciones definidas de medio, pH, temperatura, etc, la Km tiene un valor fijo para cada enzima y sirve para caracterizarla.
Describe la cinética de enzimas de muchas de ellas. Fue nombrada en honor de Leonor Michaelis y de Maud Menten. Este modelo cinético es válido solo cuando la concentración de enzima es mucho menor que la concentración del sustrato (i.e., la concentración de enzimas es el factorlimitante), y cuando la enzima no tiene regulación alostérica.
Enzima < que sustrato =KM








IV. MATERIALES:
Materiales que debe traer el alumno:
Agua destilada
Reactivos y material biológico:
- 4- aminofenazona
- Fenol
- Agua destilada
- Glucosa oxidasa
- Peroxidasa
- Glucosa 100 mg/ dl


V. PROCEDIMIENTO:
A.- Efecto de la...