Bioquimica


1. La composición de Subunidades de una proteína. Se determina que una proteína tiene un peso molecular de 400 kDa mediante cromatografía de exclusión molecular (Filtración en gel). Cuando esta proteína se analizó mediante electroforesis desnaturalizante (en presencia dodecil sulfato de sodio: SDS), se observaron tres bandas con pesos moleculares de 180, 160 y 60 kDa respectivamente. Cuandose volvió a analizar a la proteína mediante electroforesis pero ahora también en presencia de DTT (Ditiotreitol), se observaron también tres bandas pero ahora con pesos moleculares de 160, 90 y 60 kDa. Determine la estructura de subunidades de esta proteína.
R. la proteína tiene 4 subunidades, con masa moleculares de 160,90,90,60 kDa. Las dos subunidades de 90kDa (posiblemente idénticas) estánunidas por uno o más enlaces disulfuro.

2. El punto isoeléctrico (pI) de las histonas. Las histonas son proteínas que encontramos en los núcleos de las células eucariotas, fuertemente unidas al ADN, el cual contiene numerosos grupos fosfato. El punto isoeléctrico (pI) de las histonas es muy alto, alrededor de 10.8. ¿Qué residuos de aminoácidos deben estar presentes en cantidades relativamentealtas en las histonas? ¿De qué forma contribuyen estos residuos de aminoácidos a la fuerte interacción entre las histonas y el ADN?
Lys , His, Arg; carga negativa de grupos fosfato de DNA en la interacción con grupos laterales cargados positivamente en las histonas


3. Purificación de una enzima (Proteína). Un bioquímico descubre una enzima, y la purifica siguiendo el esquema depurificación que se describe a continuación: Procedimiento Total protein (mg) Activity (units) 1. Extracto crudo 20,000 4, 000, 0002. Precipitación (sal) 5,000 3, 000, 000
3. Precipitación (pH) 4,000 1, 000, 000
4. Cromatografía de 200 800, 000 Intercambio iónico
5. Cromatografía de 50750, 000 Afinidad
6. Cromatografía de 45 675, 000 Exclusión molecular
(a) A partir de la información que se muestra en el cuadro anterior, calcule la actividad específica de la enzima después de cada paso de purificación.
La actividad específica después del paso 1 es 200unidades/mg, paso 2: 600unidades/mg paso 3: 250unidades/mg, paso 4: 4,000unidades/mg, paso 5: 15,000 unidades/mg, paso 6: 15,000 unidades/mg

(b) ¿Cuál de los pasos de purificación empleados es el más efectivo? (permite el mayor incremento relativo de la pureza de la enzima).
Paso 4
(c) ¿Cuál de los pasos de purificación es el menos efectivo?
Paso 3
(d) Con base a los resultados mostrados en el cuadro de purificación, ¿existe algunaevidencia definitiva de que la enzima se encuentra pura después del paso 6? ¿Qué otros análisis podrían realizarse para determinar la pureza de la preparación enzimática?
Si, la actividad específica no incremento en el paso 6; SDS gel de electroforesis de poliacrillamida

4. La velocidad de síntesis de la Queratina del cabello. El cabello crece aproximadamente a una tasa anual de 15 a 20 cm.Todo este crecimiento se concentra en la base de la fibra del cabello, donde los filamentos de alfa-queratina se sintetizan dentro de las células epidérmicas vivas y se ensamblan en estructuras tipo cuerda (Vea la figura 4-10). El elemento estructural fundamental de la alfa-queratina es la hélice alfa, la cual requiere de 3.6 residuos de aminoácidos por vuelta y tiene una longitud de 5.4 Angstroms...