bioquimica

INFORME DE LABORATORIO N°3:
Cuantificación Espectrofotométrica de Aminoácidos y
Proteínas
Bioquímica General
Sección 2

Autores
Abricot Ana
Alarcón Mario
Castillo Paula
Docente
Godoy Margarita
Ayudante
San Martín Gabriela
Fecha
17, Septiembre 2014

INTRODUCCIÓN
Los aminoácidos corresponden a biomoléculas orgánicas formadas por un carbono alfa, un
hidrogeno, un grupo
un grupoy una cadena lateral. Son de suma importancia para
la célula ya que funcionan como reguladores de pH, neurotransmisores y señalizadores
celulares entre otras funciones, (1) ayudando así en el metabolismo celular. Una de las
funciones más importante de los aminoácidos es formar proteínas. Las proteínas corresponden
a polímeros de aminoácidos unidos a través de enlaces peptídicos (amidas) (2)las cuales
adquieren diferentes formas estructurales, ésta forma adquirida por la proteína más su
secuencia aminoacídica (3) determinan la funcionalidad del péptido, la cual será fundamental
para el funcionamiento celular ya que la mayor parte de las reacciones metabólicas de una
célula esta mediada por una proteína. Estas biomoléculas realizan funciones variadas, siendo
alguna de ellas;enzimáticas, estructurales, receptores de señales y transportadores, siendo
una de las moléculas más dinámicas a nivel celular y la más importante para ésta.
OBJETIVOS



A partir de la espectrofotometría, reconocer y cuantificar proteínas y aminoácidos
determinando la absorbancia de cada muestra biológica.
Mediante cálculos y conceptos teóricos, obtener concentraciones de las muestraspropuestas a absorbancias correspondientes.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Como primera instancia, para el reconocimiento y cuantificación de proteínas y aminoácidos a
280 nm, se tomaron 4 tubos de ensayos para rotularse del 1 al 4 y agregar 3 mL de NaCl 0,9%
p/v al tubo 1, 3 mL de glicina al tubo 2, 3 mL de triptófano al tubo 3 y por ultimo 3 mL de SAB
(Seroalbúmina de bovino) al tubo 4, para luegofinalizar leyendo la absorbancia de cada tubo en
un espectrofotómetro a 280 nm, y así determinar su concentración en mg/mL.
Como segundo paso y para cuantificar proteínas a través del método de Biuret, se rotularon 8
tubos de ensayos de 1 a 6 y MP1, MP2 respectivamente, y se agregaron con ayuda de una
micropipeta de p1000 las siguientes soluciones: NaCl 0,9% p/v, 2 mL al tubo 1, 1,8 mL al tubo2, 1,5 mL al tubo 3, 1 mL al tubo 4 y 0,5 mL al tubo 5. Luego SAB 5 mg/mL, 0,2 mL al tubo 2,
0,5 mL al tubo 3, 1 mL al tubo 4, 1,5 mL al tubo 5 y 2 mL al tubo 6, se continuo agregando
muestra problema, 2 mL a los tubos MP1 y MP2, vertiendo 2 mL de Reactivo de Biuret a cada
tubo, luego se mezclaron las soluciones presentes en cada tubo y se incubaron durante 5
minutos a 50°C, transcurridoeste tiempo se añadió cada solución a una cubeta de plástico para
luego leer su absorbancia a 540 nm en un espectrofotómetro. Para finalizar se determinó la
concentración de cada muestra en mg/mL.

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RESULTADOS
a. Reconocimiento y cuantificación de aminoácidos y proteínas por absorbancia a 280 nm:
a partir de la solución vertida en cada tubo de ensayo se obtuvieron las absorbancias
tantode aminoácidos como de proteínas. El NaCl 0,9% p/v obtuvo una absobancia de
0,000 siendo el blanco espectrofotométrico; el aminoácido glicina obtuvo una
absorbancia de 0,006; el aminoácido triptófano obtuvo una absorbancia de 0,540; y la
proteína SAB obtuvo una absorbancia de 0,652. Tabla I, ver anexo. Se determinó las
siguientes absorbancias en unidades de concentración mg/mL del aminoácidotriptófano
y de la proteína SAB, quedando en las siguientes medidas respectivamente, 0,019
mg/mL y 0,99 mg/mL. Cuadro I, ver anexo.
b. Cuantificación de proteínas por el método de Biuret: se leyó la absorbancia de 8 tubos
de ensayos y se determinó la concentración de ellos. El tubo 1 obtuvo una absorbancia
de 0,000 por ser el blanco espectrofotométrico; el tubo 2 obtuvo una absorbancia de...