Bioquimica

TEMA 8: ENZIMOLOGÍA CLÍNICA. ISOCENZIMAS. PRINCIPALES ENZIMAS CON UTILIDAD DIAGNOSTICA:
1. Enzimas en el plasma
La actividad de la mayoría de las enzimas en sangre u otros líquidos corporales es muy baja.
• El hígado sintetiza y secreta a la sangre numerosas enzimas que cumplen su función en la propia circulación:
o Hemostasia: trombina, plasmita.
o Metabolismo de las lipoproteínas:lecitina-colesterol-aciltrasferasa.
o Metabolismo de proteínas.
• Otras enzimas pasas a la circulación durante el proceso de recambio celular:
El aumento plasmático de estas enzimas proporcionará información sobre la alteración del tejido de procedencia.
La determinación de las actividades enzimáticas proporciona una importante información diagnostica y pronostica.
Modificación de la actividadenzimática sérica:
Depende de:
Su velocidad de llegada a la circulación.
De la estabilidad de su actividad.
Su velocidad de eliminación (inactivación).
Incremento de la actividad enzimática en sangre:
Inducción de la síntesis enzimática por fármacos.
Necrosis celular:
Hipoxia: anemia, estrechamiento o bloqueo de venas y arterias.
Agentes químicos o farmacológicos.
Agentes físicos: caloro frío extremo, radiaciones, energía eléctrica.
Agentes microbiológicos.
Mecanismos inmunitarios.
Defectos genéticos.
Enfermedades nutricionales.
Un incremento del recambio metabólico del tejido: proliferación celular (cáncer).
Una obstrucción de la secreción celular. Ej. Alfa-amilasa en la pancreatitis.
Menor degradación o eliminación.
Disminución de la actividad enzimática en sangre:Compuestos que interfieren es su actividad catalítica: Compuestos organofosforados (colinesterasa).
Menor biodisponibilidad de los cofactores: peridoxal-P (aminotrasferasas).
2. Isoenzimas:
Enzimas que poseen la misma actividad catalítica y que están codificadas por genes distintos o por el mismo gen, pero con distintas modificaciones postraduccionales.
Si una isoenzima predomina en un tejidoconcreto, su determinación es útil para identificar el origen del aumento de la actividad enzimática.
Amilasa
CK
Fosfatasa alcalina
LDH.
Diferentes características físico-químicas, catalíticas y antigénicas.


Diferenciación:
• Mediante métodos inmunoquímicos: sustratos o inhibidores específicos.
• Mediante electroforesis.


3. Determinación de la actividad enzimática:
La reacciónenzimática depende de:
Concentración de la enzima
Tipo y concentración de sustrato
Temperatura
pH
Existencia de cofactores o inhibidores.
Utilizar métodos estandarizados:
• Condiciones en que la velocidad de la reacción dependa únicamente de la concentración de la enzima en el medio.
La velocidad de una reacción puede determinarse midiendo:
• El consumo de sustrato por unidad de tiempo.
• Laaparición de producto por unidad de tiempo. De forma directa o indirecta.
Unidad de medida de la actividad enzimática:
• katal (ktal. nº de moles de sustrato trasformados por segundo) (SI).
• Unidades internacionales (UI, IU o U): nº de moles de sustrato transformados por minuto.
Concentración catalítica, en líquidos biológicos: kat/L o U/L.
1mktal/L= 60 UI/L
Contenido catalítico: encélulas o biopsias: kat/Kg de células.
Velocidad de la reacción catalizada: moles de sustrato transformados por segundo.
• Actividad molecular: moles de sustrato trasformados por segundo y por mol de enzima, (depende de las condiciones de reacción).
Métodos:
1. Métodos de equilibrio o punto final: Más utilizados.
Problemas:
• Muestras con actividades enzimáticas elevadas.
• Como solo se mide unpunto no se puede saber si la velocidad ha sido lineal durante toda la prueba.
2. Métodos de múltiples puntos: Miden el cambio concentración a varios intervalos durante el curso de la prueba. Sistemas automatizados.
Son prácticos cuando puede determinarse un cambio simple de la absorbancia y relacionarse con un cambio de la concentración.
Ej. Reacción de óxido-reducción que implica la...