bioquimica

Universidad de Santiago de Chile
Facultad de Química y Biología
Departamento de Biología








Determinación de las Propiedades Cinéticas de la enzima Fosfatasa Ácida de Germen de TrigoIntegrantes: Paloma Carrasco
Emilia González
Hugo Hernández
Francisca Uribe
Asignatura: Bioquímica
Profesor: Pablo Nelson Hunt
Ayudante: María José Olivares
Fecha: 18/06/2012OBJETIVOS

Determinar los parámetros cinéticos de la enzima fosfatasa ácida de germen de trigo y el efecto del fosfato en la reacción.

INTRODUCCIÓN

La cinética enzimática relaciona la velocidadde las reacciones que son catalizadas por enzimas. Dentro de los diversos modelos que explican la cinética enzimática, se dará mayor énfasis al modelo de Michaelis-Menten. Este modelo explica laspropiedades cinéticas donde una enzima (E) se combina con un sustrato (S) para formar el complejo enzima-sustrato (ES). Este complejo puede formar un producto (P) o disociarse en E y S.
La velocidad(V) de formación del producto viene dada por la ecuación de Michaelis-Menten:

Donde Vmax representa la velocidad máxima del sistema, Km es la constante de Michaelis-Menten y [S] es laconcentración del sustrato.

Por otro lado, la velocidad de reacción puede expresarse como:

Linealizando la ecuación de Michaelis Menten se obtiene la relación de los dobles inversos:


Donde Km/Vmaxrepresenta la pendiente de la recta y 1/Vmax es el coeficiente de posición


DATOS Y RESULTADOS

Curva de calibración

p-nitrofenol (μmoles)
Absorbancia
0,0000
0,000
0,0075
0,351
0,0150
0,8280,0300
1,606
0,0450
2,380
0,0600
3,130





Ajuste lineal: A=52,543 P + 0,0032
R2=0,9993

Donde A es la absorbancia y P es la cantidad de p-nitrofenol (μm).
Cinéticaenzimática de Michaelis-Menten

Tabla 1: Valores de dobles recíprocos para la enzima sin inhibidor.
1/[S]
1/V
0,000
0,000
3,200
1842,321
1,600
2480,003
1,067
1519,169
0,800
1311,826

Tabla...