bioquimica

INTRODUCCIÓN.
la fermentación alcohólica donde el piruvato es convertido a acetaldehído por intervención de la enzima piruvato descarboxilasa y luego es usado como aceptor de protones para oxidar el NADH en NAD+ produciéndose por consiguiente etanol.
Las levaduras son cuerpos unicelulares (generalmente de forma esférica) de un tamaño que ronda los 2 a 4 μm y que están presentes de forma naturalen algunos productos como las frutas, cereales y verduras. Son organismos anaeróbicos facultativos, es decir que pueden desarrollar sus funciones biológicas sin oxígeno.
Para conseguir la acumulación de piruvato y poderlo detectar, la fermentación se llevara a cabo en condiciones alcalinas para inactivar la enzima piruvato descarboxilasa. Los metabolitos piruvato y acetaldehído seencuentran presentes normalmente en muy baja concentración, por lo tanto, para demostrar su existencia como intermediarios en el camino metabólico, es necesario impedir que sean transformados en otros compuestos. Este procedimiento se usa mucho para estudiar caminos metabólicos y se puede realizar:
- Bloqueando la enzima que cataliza la conversión del compuesto que se está investigandomediante inhibidores.
- Cambiando las condiciones fisiológicas para que la enzima funcione a una velocidad muy por debajo de su actividad máxima. Usando un agente que atrape el intermediario y que forme un compuesto que no pueda metabolizarse.











OBJETIVO.
Determinar y observar la producción de piruvato durante el proceso de fermentación en levaduras.MATERIALES Y REACTIVOS.
Tubos de ensayo ( 4 )
Tubos para centrifuga (2)
Beaker 400 ml
Pipetas de 5 ml (3)
Balanza
Baño de maria
Pinzas para tubos de ensayo (2)
Termómetro
Espátula
Solución de glucosa al 10%
Levadura
Fosfato de sodio dibasico o.5M
Acido tricloro acético al 10%
2,4- dinitrofenilhidracina saturado en HCL 2 M
NaOH 10%























PROCEDIMIENTO.

Se llevaron a cabo tresprocesos:

PRIMER PROCESO.

Se uso un tubo de ensayo “A” donde se agrego 2.5ml de solución de glucosa al 10%, luego se agrego 2,5ml de suspensión de levadura al 10% P/V en solución de fosfato de sodio dibásico 0.5 M. Después de esto el tubo “A” se coloco en baño de maría a 37°c durante una hora y agregamos al tubo 2ml de ATA al 10% P/V, mezclamos fuertemente y centrifugamos durante 10 minutos a 2500r.p.m.
Luego se tomo 1ml de sobrenadante y se coloco en otro tubo de ensayo, enseguida se le agrego 0,5ml de 2,4-dinitrofenilhidracina en HCL 2M, se mezclo fuertemente e inmediatamente se le agrego 1ml de NaOH al 10% y 0,5ml de agua.

SEGUNDO PROCESO.

Se uso un tubo de ensayo “B” donde se agrego 2.5ml de solución de glucosa al 10%, luego se agrego 2.5 ml de suspensión de levadura al 10% P/V ensolución de fosfato de potasio monobásico 0.5 M. Despues de esto el tubo “B” se coloco en baño de maria a 37°c durante una hora y agregamos al tubo 2ml de ATP al 10% P/V, mezclamos fuertemente y centrifugamos durante 10 minutos a 2500 r.p.m.
Luego se tomo 1ml de sobrenadante y se coloco en otro tubo de ensayo, enseguida se le agrego 0,5ml de 2,4-dinitrofenilhidracina en HCL 2M, se mezclo fuertemente einmediatamente se le agrego 1ml de NaOH al 10% y 0,5ml de agua.

TERCER PROCESO.

Se agrego 1ml glucosa en tubo de ensayo, a esta glucosa se le agrego 0.5 ml de solucion saturada de 2,4 dinitrofenilhidracina en HCl 2M, se mezclo fuertemente y luego se tomo 0.5ml de esta mezcla en otro tubo de ensayo, se le agrego 1 ml de NaOH al 10%, y luego se le agrego 0.5 ml de agua.











PREGUNTAS DEACTIVIDAD COMPLEMENTARIA.
1. Que conclusiones se podrían sacar de las muestras de los tubos A y B?
R/








Según nos muestra la imagen decimos que para él tuvo A (tubo ubicado a la izquierda), podemos ver una coloración café claro y que para el tubo B (tubo ubicado a la derecha), podemos ver una coloración amarilla con un precipitado café oscuro.
Entonces teniendo en...