BIOQUIMICA



FOTOCOLORIMETRIA

INTRODUCCIÓN
Una de las técnicas instrumentales de laboratorio más utilizadas en bioquímica es la Espectrofotometría. Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda.
Esta técnica se caracteriza por suprecisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas) y estado de agregación (sólido, líquido, gas).
En el cual se puede detectar de forma específica las moléculas, debido a los efectos de las radiaciones electromagnéticas que se emplean en estas. Ya que además, las moléculas son capaces de absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energíainterna. Permitiendo así, el inicio de ciclos vitales de muchos organismos, como por ejemplo el de la fotosíntesis en plantas y bacterias.
“La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energía llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energía.”
Con loanterior, se puede interpretar mejor la siguiente imagen que describe cómo funciona un espectrómetro al ser emitida cierta cantidad de radiaciones electromagnéticas en dirección a la muestra a analizar. En la cual se toma en cuenta cuanto de la muestra logro ser excitada, por consiguiente cuanto de esta energía absorbió. Y cuánto de esta energía no se absorbió, es decir, se transmitió.Para la correcta medición de esta energía absorbida y transmitida se toma en cuenta la LEY DE LAMBERT – BEER el cual materializa los procesos de absorción de las radiaciones electromagnéticas.

I. MATERIALES
































II. PROCEDIMIENTOS Y RESULTADOS

A. Determinación de la longitud de máxima absorción.
Se prepararon 5 tubos de ensayo con permanganato de potasio (KmnO4) yagua destilada en diferentes proporciones, se homogenizaron y se determinaron sus respectivas concentraciones.


TUBO

1
2
3
4
5
KMnO4 6mg%
0,3 ml
0,6 ml
0,9 ml
1,2 ml
1,5 ml
agua destilada
4,7 ml
4,4 ml
4,1 ml
3,8 ml
3,5 ml
CONCENTRACION%
0,36mg
0,72mg
1,08mg
1,44mg
1,8mg

TEORICAMENTE:

T1: 6mg% . 0,3 = C1 . 5 ml
C1 = 6 x 0,3 ml = 0,36 mg % C1: concentración estándar del Tubo 15 ml
T2: 6mg% . 0,6 = C2 . 5 ml
C2 = 6 x 0,6 ml = 0,72 mg % C2: concentración estándar del Tubo 2
5 ml
T3: 6mg% . 0,9 = C3 . 5 ml
C3 = 6 x 0,9 ml = 1,08 mg % C3: concentración estándar del Tubo 3
5 ml
T4: 6mg% . 1,2 = C4 . 5 ml
C4 = 6 x 1,2 ml = 1,44 mg % C4: concentración estándar del Tubo 4
5 ml
T5: 6mg% . 1,5 = C5 . 5 mlC5 = 6 x 1,5 ml = 1,80 mg % C5: concentración estándar del Tubo 5
5 ml

Luego fueron llevadas al espectrofotómetro para obtener sus absorbancias en diferentes longitudes de onda. Estos fueron los resultados obtenidos.


absorbancia a:
TUBO

1
2
3
4
5
425 nm
0,004
0,017
0,018
0,025
0,031
525 nm
0,044
0,093
0,145
0,195
0,247
650 nm
0,004
0,008
0,010
0,015
0,019
De acuerdo losdatos obtenidos se concluye que la longitud de onda de máxima absorción para las 5 muestras es a 525 nm, por lo que se trabajaron con esos resultados para hallar los factores de calibración respectivamente.
NOTA: Véase la tabla de absorbancia(eje y) vs concentración (eje x) (3 absorbancias)

B. DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN
Se realizó una tabla de absorbancia (eje y) vs concentración(eje x) ( en la absorbancia optima)
NOTA: Véase la tabla de absorbancia(eje y) vs concentración(eje x) (absorbancia optima)
Hallamos los factores de calibración de cada muestra.







SEGÚN LA TEORÍA:

FC1 = 0,36 = 8.182 FC1: Factor de calibración estándar del Tubo 1
0,044
FC2 = 0,72 = 7.742 FC2: Factor de calibración estándar del Tubo 2
0,093
FC3 = 1,08...