Bioquimicas Job

METODOS
MICROBIOLÒGICOS PARA
IDENTIFICACIÒN
M. en C. Job Gonzaga Bernachi
Jefe de Laboratorio
CS T-III San Pablo Oztotepec
Profesor de Asignatura “A”
Instituto Politécnico Nacional
CECyT 15 DAE

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE
IDENTIFICACIÓN MICROBIANA


Criterios morfológicos



Tinción diferencial



Pruebas bioquímicas



Tipificación con fagos



Pruebas serológicas



Detecciónmolecular

IDENTIFICACIÓN
BACTERIANA


Cada género, inclusive especie, tiene diferentes reacciones
cuando se les enfrentan diferentes reactivos, esto se hace a
partir de un cultivo puro, ya la bacteria aislada, con estas
pruebas podremos decir casi con exactitud de que género y qué
especie es esta bacteria.



Cada género de bacteria, inclusive especie,

tiene diferentes reacciones cuando se lesenfrentan a diferentes reactivos, esto se hace a
partir de un cultivo puro, ya la bacteria aislada,
con estas pruebas podremos decir casi con
exactitud de que género y qué especie es esta
bacteria. A estas pruebas se les ha como
primarias, secundarias y complementarias.

Pruebas Primarias
(identificación)

TINCIÓN DE GRA

Revela la forma de la bacteria, agrupación y grupo
taxonómico al que pertenece:Gram (+) o Gram (-).
Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las
paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
se deshidratan los poros cerrándolos,
impidiendo que escape el complejo cristal
violeta/yodo,

Gram (+)

no retiene el complejo de cristal violeta/y

Gram (-) E. coli cells

Tinción de Ziehl Neelsen
Es una técnica de tinción diferencialrápida y
económica, para la identificación de
microorganismos patógenos.
Se denomina tinción ácido-alcohol resistente y es específica para una serie
de bacterias con estructura de pared particular, las micobacterias. La
pared de las micobacterias no está basada en peptidoglicano como las
bacterias gram positivas y gram negativas, sino en ácidos micólicos. Esta
particularidad las hace resistentes a ladecoloración con ácido y alcohol
que no se produce en casi ningún otro tipo bacteriano.
Utiliza tres reactivos. El colorante primario es la
fucsina que tiñe toda la preparación de rojo brillante.
Como mordiente se utiliza flameado de la
preparación con el colorante. La solución
decolorante elimina el colorante primario
excepto el los bacilos ácido alcohol resistentes.
(BAAR). Por último el azul demetileno tiñe de
azul el resto de la preparación

Tinción de esporas
La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los géneros
Bacillus y Clostridium.
Alunas bacterias son capaces de desarrollar formas de resistencia
denominadas esporas como mecanismo de defensa a agresiones
ambientales. Son estructuras de pared gruesa en las que el
microorganismo logra soportar las condicionesdesfavorables de calor,
desecación, acidez, etc. Cuando las condiciones ambientales vuelven a
ser favorables las esporas "germinan" y vuelven a generarse formas
vegetativas.
Están descritos varios métodos para teñir esporas.
El de Wirtz-Conklin o tinción con verde malaquita.
Este colorante se une fuertemente a las esporas
gracias a la utilización de calor como mordiente.
La fase de decoloración en este casose realiza con
agua abundante. Las formas vegetativas pierden el
color verde y se tiñen con el colorante de contraste
(fucsina o safranina).

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
PARA COCOS GRAM +
1.
2.
3.
4.
5.
6.

DNasa
Prueba del manitol salado
Bilis esculina
CAMP
Hidrólisis del hipurato
Voges –Proskauer

Pruebas de sensibilidad a ATB
1.
2.
3.

Disco de Optoquina
Disco de novobiocina
Disco de BacitracinaPRUEBA DE CATALASA
La catalasa es una enzima que descompone al
peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua, esta
enzima es similar a la estructura de la hemoglobina.
Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros
la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias
facultativas tienen catalasa.
La base de esta prueba es demostrar la presencia de
la enzima catalasa, colocando 2 o 3 gotas al...