BIOQUIMICAS

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
ESCUELA DE TECNOLOGIA MÉDICA
ÁREA DE LABORATORIO CLÌNICO

Práctica: N ° 2
GRUPO: 2

TEMA: PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION DE BACILOS GRAM NEGATIVOS.
OBJETIVOS:
Entender los principios bioquímicos de las pruebas para poder interpretar los resultados.
Realizar las pruebas bioquímicas para la identificaciónrespectiva de las bacterias.
Interpretar correctamente los resultados de las bioquímicas para saber de que bacteria se presume esta en el cultivo.
MATERIALES:
Cepas de bacterias Gram negativas.
Urea.
Malonato.
Medio citrato de Simmons.
Medio Kligler, Mio, Lisina.
Rojo de metilo.
Fenilalanina.
Suero fisiológico al 0,9%.
Asas bacteriológicas.
Mechero de bunsen.
Discos de oxidasa.Discos de ONPG.
Reactivo de Ehrlich.
Alfa naftol.
KOH al 40%
Cloruro ferrico.
Peróxido de hidrogeno.
MARCO TEORICO:
Las pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias. Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azúcares, la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de compuestos coloreados, etc.Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con base a pruebas bioquímicas.



PRUEBA DE LA OXIDASA:
Se toma con un palillo grueso de madero una muestra bacteriana a partir de una colonia aislada proveniente de un cultivo de 24h.
La muestra se pone en contacto con la tira o disco impregnado.
Se debe observar una coloración morada en un lapso nomayor a 30 segundos para que sea positivo, de lo contrario el resultado es negativo.
Control Positivo: Pseudomonas aeruginosa Control Negativo: Escherichiacoli






El color azul-morado en el disco se interpreta como oxidasa positiva.
La carencia de color en el disco se interpreta como oxidasa negativa.
PRUEBA DE LA CATALASA:
La catalasa, va a degradar el peróxido de oxigeno que seproduce como consecuencia de la acumulación de oxígeno. Para esto en un tubo de ensayo colocamos 2 o 3 ml de peróxido de oxígeno, tomamos muestra con el asa de siembra y la introducimos en el tubo, el resultado será positivo si se observa la producción de pequeñas burbujas.
Medio MIO (Movilidad, Indol y Ornitina)
Este medio como su nombre lo indica sirve para observar la movilidad, la producciónde indol y descarboxilación de la ornitina. La movilidad se detectará por la presencia de turbidez alrededor del punto de inoculación.

El indol se formará si la bacteria tiene la capacidad de producir la enzima triptofanasa que desdoblará el aminoácido triptófano en indol, ácido pirúvico y amonio. El indol es incoloro pero al reaccionar con el reactivo de Kovacs (p-dimetil-aminobenzaldehido)que se adiciona después de que creció la bacteria, dará un color rojo violeta.
Por lo que respecta a la descarboxilacíon de la ornitina como el medio tiene púrpura de bromocresol y una pequeña cantidad de glucosa cuando esta se fermenta se produce un color amarillo en el fondo (ornitinadescarboxilasa negativa), sin embargo al descarboxilarse la ornitina se produce putresina la cual es alcalina ysobrepasa la acidez dada por la fermentación de las glucosa resultando en un color morado en el fondo.
Prueba del Indol
Pone de manifiesto la presencia de la encima Triptofanasa en nuestras bacterias, si está presente degradará el triptofano y liberará al medio Indol, para revelar su presencia usaremos el reactivo de Kovac; si hay indol se formará un anillo rojo en la superficie, sino este seráamarillo. Para esto sembramos en caldo con triptofano.

Citrato de Simmons
Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y compuesto amoniacales como única fuente de nitrógeno. El medio contiene citrato sódico, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador; este se tornará azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que...