BIOQUIMICO

COMPARACION ENTRE DOS TECNICAS DE EXTRACCION DE ADN TOMANDO EN CUENTA SU RENDIMIENTO Y PUREZA POR ESPECTOFOTOMETRIA Y ELECTROFORESIS
Martínez Luis Iván; Preciado Martínez Eduardo Axel, Universidad Nacional Autónoma de México
ABSTRACT:
The extraction and purification of genetic material are essential steps in the development of new technologies; these techniques are also required in the dayto day activities in either forensic, investigation or diagnostic laboratories. There are several kinds of techniques that involve the utilization of different materials and chemical solutions, but they were all elaborated to achieve the same goal: to isolate DNA from a living cell, while trying to eliminate as much traces of proteins and other types of contamination as possible.                                                             The following work shows a DNA extraction made to leukocytes by two different methods (phenol-chloroform and perchlorate), these techniques have their own highlights and nadirs. The samples where quantificated by spectrophotometric and electrophoretic analysis of DNA.
PALABRAS CLAVE:
DNA, obtención, cuantificación, electroforesis, fenol-cloroformo, percloratode sodio, extracción, espectrofotometría, identificación, pureza.
INTRODUCCIÓN:
Puede obtenerse una muestra de DNA a partir de cualquier tipo de organismo o microorganismo no importa si es planta o animal. Dichos organismos nos pueden proveer copias moleculares de genes.
Este material puede ser empleado para la construcción de bibliotecas, en el análisis de hibridación, como molde dereacciones de amplificación, entre otras aplicaciones.
Los métodos de aislamiento de ácidos nucleicos, sin importar el tipo o procedencia, siguen siempre cuatro etapas básicas que se describen a continuación.
Lisis celular:
Los métodos de lisis celular más utilizados son los siguientes:
a)Detergentes: los detergentes aniónicos se utilizan básicamente para extraer DNA de parásitos, células en cultivoy tejido, siendo el dodecil sulfato de sodio (SDS), Nonidet P40 y sarkosil unos de los más usados para la ruptura de la membrana celular.

b) Enzimas: se utilizan especialmente para la extracción de DNA bacteriano, total o plasmídico, siendo la lisozima la enzima de elección. La lisozima actúa desestabilizando la pared celular de bacterias  Gram negativas,  pues rompe las uniones  del tipoglucosídicas entre los  polisacáridos N-acetilglucosamina y el ácido N-acetilmurámicos (NAM)
Desnaturalización de proteínas
Se lleva a cabo mediante el uso de enzimas proteolíticas tales como la proteinasa K. Algunos protocolos de extracción realiza la lisis con detergentes como el SDS en presencia de la proteinasa K en un solo paso. Adicionalmente, la digestión se acompaña de EDTA para inhibir laacción de las DNAasas.
Alternativamente, para organismos ricos en glicoproteínas como las micobacterias y triponosomas, entre otros, luego de la digestión se realiza un tratamiento con el detergente catiónico CETAB en presencia de NaCl 0.7 M, con el fin de eliminar las glicoproteínas y obtener un DNA más puro.
La remoción de proteínas es importante, para evitar que puedan interferir con losprocedimientos subsecuentes, debido a que algunas de ellas tienden a adherirse a los ácidos nucleicos y degradarlos. (Puerta, 15)
Purificación de DNA
Un método clásico de extracción, se realiza con solución amortiguadora neutral o alcalina de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico (25:24:1). Esta solución es inmiscible en agua, por lo que forma dos capas (fases) cuando se adicionan al extracto celular.Cuando la mezcla es agitada vigorosamente, las proteínas son desnaturalizadas y precipitadas a la interfase, mientras que los ácidos nucleicos se encuentran en la fase acuosa. (Lizcano, 41)
Otra forma de obtener una muestra pura de DNA es desnaturalizando la molécula con compuestos que interfieren en la formación de puentes de hidrógeno, para esto se utilizan compuestos como...