Bioseparaciones

Bioseparaciones |
Interferón α-2b |
Arturo Rodríguez, Juan Jesús Cruz Maldonado, Miriam Berenice Abrego Ruiz, Cintia Mayra Sánchez Sánchez |
21-11-2011
21-11-2011

Contenido
Introducción 2
Propiedades 2
Estructura 2
Formulación 3
Estabilidad y periodo de caducidad 3
Actividad específica 3
Grado de pureza 3
Endotoxinas 3
Nombre comercial 4
Costos 4
Enfermedades quetrata 4
Dosis 4
Cultivo 5
Sistema de expresión 5
Producción 5
Clarificación 6
Centrifugación de biomasa 6
Balance de materia de la centrifugación 7
Rompimiento celular 7
Balance de materia del homogeneizador 8
Centrifugación para recuperar cuerpos de inclusión 9
Balance de materia de la centrifugación 10
Purificación 11
Solubilización de cuerpos de inclusión 11
Balance demateria de la solubilización 11
Balance de materia de la microfiltración 13
Plegamiento de proteína interferón alfa 2b 14
Balance de materia del plegamiento 14
Cromatografía 14
Cromatografía de intercambio aniónico 14
Balance de materia para la cromatografía de intercambio aniónico 15
Cromatografía de interacción hidrofóbica 15
Balance de materia de cromatografía de interacciónhidrofóbica 16
COSTOS 17
LEGISLACIÓN 17
Bibliografía 17

Introducción

Los interferones (IFN) son citoquinas naturalmente producidas, con aplicaciones terapéuticas basadas en su actividad antiviral, antiproliferativa e inmunomoduladora. Como antivirales inhiben la replicación del virus en las células infectadas, suprimen la proliferación celular y como inmunomoduladores estimulan laactividad fagocítica de los macrófagos y aumentan la citoxicidad específica de los linfocitos hacia células blancas (Imgenex, 2011).
Los interferones del tipo I (IFNα/β) son producidos en la mayoría de las células en respuesta a infecciones virales o microbianas. El locus del IFNα2 se compone de tres variantes IFNα2a, IFNα2b e IFNα2c, el IFNα2b es el más detectado en el DNA humano (DrugBank, 2011).Propiedades
El interferón alfa-2b (IFNα2b) es una proteína soluble en agua, no glicosilada, formada por 165 aminoácidos, su peso molecular aproximado es de 19 kDa. Este producto es soluble en agua, su punto isoeléctrico es de 5.99, mientras su valor de hidrofobicidad es de -0.339. Su punto de ebullición es de 61°C (Imgenex, 2011) (DrugBank, 2011).
Estructura
La Figura 1, obtenida deDrugbank, muestra la estructura tridimensional de una molécula de interferón alfa-2b.

Figura [ 1 ]: Estructura tridimensional del interferón alfa-2b
Formulación
Para la formulación del producto se lleva a cabo su liofilización quedando en una solución de 1 mg/mL con 2.3 mg de fosfato de sodio dibásico y 0.55 mg de fosfato de sodio monobásico como buffers. Para reconstituir al producto liofilizadoen agua estéril se debe diluir en no menos de 100 µg/mL (Imgenex, 2011).
Estabilidad y periodo de caducidad
El interferón alfa-2b liofilizado permanece estable a temperatura ambiente por 3 semanas. En el caso de soluciones inyectables, éstas permanecen estables a 35°C por 7 días, y a 30°C por 14 días. (DrugBank, 2011).
Para almacenamiento a largo plazo, en el caso de la proteína liofilizadase debe mantener a temperaturas de -20°C y se mantendrá estable por 2 años. Para el caso de soluciones reconstituidas se recomienda la adición de una proteína transportadora (0.1% Albumina de suero humana o bovina) y mantenerlo a temperaturas menores a -18°C, de esta forma su periodo de caducidad puede ser hasta de 6 meses y se deben evitar ciclos de congelación-descongelación (Imgenex, 2011).Actividad específica
La actividad específica del interferón alfa-2b es de aproximadamente 2.6 x 108 UI/mg proteína. (DrugBank, 2011).
Grado de pureza
El interferón alfa 2b debe mostrar un grado de pureza de >98% (DrugBank, 2011).
Endotoxinas
El producto debe tener menos de 0.1 Unidades de Endotoxinas/µg de interferón alfa 2-b.
Nombre comercial
Intron A Schering-Plough Corp,NJ,USA. Se...