bioseparaciones

BIOTECNOLOGIA

Enzimas de restricción
• Endonucleasas que reconocen dianas
específicas en el ADN
• Protegen a cada cepa de bacterias de otro ADN
que no pertenece al sistema
• El ADN propioestá protegido porque las dianas
de restricción están metiladas (metilasa)
• Clasificación
–
–
–
–

Tipo I
Tipo II
Tipo III
Otros tipos

Enzimas de restricción de tipo II
• Son las mejorestudiadas
• Cortan en el mismo lugar que reconocen
• Las secuencias diana son palindrómicas (capicúa):

PCR – Reacción en Cadena de la Polimerasa

RT-PCR

Electroforesis de ADNElectroforesis de Proteínas

BLOTTING
• SOUTHERN (DNA)
• NORTHERN (RNA)
• WESTERN (proteínas)

Southern Blot

Northern Blot

INGENIERÍA GENÉTICA
Amplificación de secuencias y
obtención deADN recombinante

Clonaje
• Utilización de una unidad replicativa procariótica
para obtener grandes cantidades de un
fragmento de ADN de interés.
• La unidad replicativa constituye el vector.
•El fragmento amplificado se denomina inserto.

Proceso de clonaje
1) Generación del fragmento de ADN
2) Elección del vector conveniente
3) Unión del fragmento (inserto) al vector
4)Introducción de la construcción en un organismo
en el que se pueda reproducir
5) Selección del recombinante

Vectores procarióticos
•
•
•
•

Plásmidos
Cósmidos
Bacteriófagos
Cromosomas artificialesde bacterias

Plásmidos
• Moléculas de ADN circular
extracromosómico, presentes
naturalmente en bacterias.
• Se replican autónomamente
utilizando las enzimas de la
bacteria.
• El número decopias por bacteria
es variable.

Plásmido para
expresión en E. coli

Electroforesis de ADN en gel de agarosa 1%. Calle 3:
marcadores de peso molecular; Calle 4: plásmido
pET-3a cortadocon PstI; Calle 5 pET-3a cortado con
PstI y XbaI; Calle 6 : el pET-3a cortado con PstI y
NdeI.

INGENIERÍA GENÉTICA
VEGETAL
METODOLOGÍA

¿Para qué plantas transgénicas?
• Rendimiento y...