Biotecnología Animal

ÁREA DE CIENCIAS DE LA VIDA
BIOTECNOLOGÍA DE LOS RR.NN

Biotecnología animal

Biotecnología de la Reproducción: Tigrillo

Protocolo
Como base para el siguiente trabajo, se ha tomado como referencia el ciclo estral de la gata (Felis catus), para la realización de un protocolo de la biotecnología de la reproducción del tigrillo (Leopardus pardalis), pues según su clasificación taxonómicapertenecen al mismo Orden y Familia (Tabla 1). El interés en esta especie se debe a que forma parte del Libro Rojo de Especies en Peligro de Extinción del Ecuador, por pérdida de hábitat, tráfico de piel y por su venta como mascotas..

Gato
Tigrillo ecuatoriano
Reino
Animalia
Animalia
Filo
Cordado
Cordado
Clase
Mamífero
Mamífero
Orden
Carnívoro
Carnívoro
Familia
Félidos
FélidosNombre científico
Felis catus
Leopardus pardalis

1. AMBIENTACIÓN DE LOS INDIVIDUOS
Es necesario previo a cualquier otro proceso, la adaptación de macho y hembra de tigrillo a su nuevo ambiente artificial; se deben simular las condiciones de temperatura, luz, humedad y vegetación adecuada, para que las funciones biológicas de los ejemplares no resulten alteradas.
2. PREPARACIÓN DE LOSINDIVIDUOS
2.1 Extracción de Esperma
El esperma se obtiene mediante una electroeyaculación bajo anestesia profunda (el macho debe estar en ayuno de agua las 24 horas anteriores).
Verificar si la vejiga está vacía, caso contrario vaciarla mediante masajes.
Se puede utilizar tiletamina-dolazepam (Zoletil®) como mezcla para evitar la contaminación de la muestra con orina durante laelectroeyaculación.
Para este protocolo se utilizará un eletroeyaculador comercial que permite programar con exactitud la duración de los impulsos eléctricos, y de los intervalos de descanso, lo que hace su uso más sencillo y preciso.
Se emplea una sonda rectal, de plástico o teflón. La sonda lleva acoplados en su superficie los electrodos que transmiten los estímulos.
El macho, anestesiado, se coloca echadolateralmente, de forma que pueda accederse fácilmente tanto al ano como al pene. Si hay presencia de heces en el recto, se retiran manualmente.
Se lava la zona perineal con agua tibia, y se seca perfectamente; a continuación se lubrica la sonda, y se inserta rectalmente.
Se debe asegurar que la sonda esté ubicada en los electrodos sobre la posición esperada de los órganos accesorios.
Seutiliza un régimen estandarizado de estímulos, según bibliografía consultada, se pueden utilizar de 2 a 3 serie de impulsos, dejando descansar al animal 7-9 minutos entre cada serie; cada serie se compone a su vez de 30 estímulos, aumentado cada vez el voltaje dejando un espacio de 3 segundos entre estímulos hasta que el voltaje sea cero.
Registrar los efectos que produce cada estímulo. Puedeexistir o no erección durante el proceso, sin variación de eyaculado.
Mientras se dan los estímulos, el esperma es recogido del pene en una pajilla estéril, previamente calentado a 37 °C para evitar que se produzca un choque térmico
Con una micropipeta, separamos los restos del esperma de la punta del pene.
El esperma procedente de cada serie se mantiene separadamente hasta el final del proceso,para evitar mezcla de diferentes calidades de esperma.
2.2 Valoración de la muestra
Valorar la movilidad, la concentración de esperma y el volumen obtenido de la misma.
Con micropipeta, tomar una gota de semen y colocar en portaobjetos, para observar en microscopio.
CALIDAD DE MOVIMIENTO DEL ESPERMA
0
No hay movilidad
1
Leve movilidad
2
Movimiento ocasional con leve progresión
3Movimiento con leve progresión
4
Movimiento con progresión continua
5
Movimiento con progresión rápida
Todas las muestras de semen deben tener la misma temperatura para evitar choque térmico, caso contrario se hace una nueva valoración de la movilidad y el status del conjunto.
Cálculo de la concentración de espermatozoides:
Número de espermatozoides por centímetro cúbico de esperma;...