Biotecnologia Farmaceutica

Propuesta para realizar una mejor determinación y control de la actividad enzimática de la bromelaina
La Bromelina es una enzima que cataliza la hidrólisis de los enlaces peptídico en
Proteínas. Seextrajo por primera vez del jugo de la piña a finales del siglo XIX.
Esta enzima tiene importantes e innovadoras aplicaciones en la industria alimenticia y farmacéutica, tan sólo en México sonimportadas 30 toneladas de Bromelina al año, lo que representa una oportunidad de negocio para sustituir importaciones y disminuir gastos de divisas, además de poder sustituir las importaciones de enzimasproteolíticas con las mismas propiedades y usos, como es el caso de la papaína.

Para realizar la determinación de la actividad enzimática se realiza cotidianamente un estudio colorimétrico como esla determinación de la actividad enzimática por el método de Ortega y del Castillo el cual consiste en emplear como sustrato, caseína al 1%. La cual se preparara disolviendo 1g de caseína en reguladorde fosfatos 0.05M pH 7.6 y sometiéndola a ebullición en baño maría durante 20 minutos para lograr su desnaturalización; se deja enfriar y se lleva a un volumen de 95mL con regulador de fosfatos 0.05MpH 7.6. Al preparar la mezcla enzima-sustrato la concentración final de caseína es del 1%. Para realizar la medición de la actividad proteolítica se sigue el siguiente proceso; en un baño atemperatura de 35ºC, se colocan tubos de ensayo con 0.95mL de caseína para su incubación durante 10, 30 ó 60 minutos, se agregaran 0.5mL de la preparación enzimática y se dejara actuar durante el tiemponecesario. La reacción se detiene adicionando 1.5mL de ácido tricloroácetico (ATC) al 5%. Simultáneamente se corre un testigo al que le será adicionando primero el ATC y al final la preparación enzimática.Al terminar la reacción las muestras serán centrifugadas durante 20 minutos a 8000rpm. Finalmente, los productos de la hidrólisis enzimática que se encontraran en el sobrenadante, aminoácidos libres...