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LOS INSTRUMENTOS BÁSICOS DE LA
INVESTIGACIÓN DE GENES.

Técnicas de transferencia o
“blotting”

Las técnicas Southern blot y
Northern blot se utilizan
para separar y caracterizar
ADN y ARN
respectivamente.

En las últimas décadas la tecnología de
recombinación del ADN también
conocida como ingeniería genética, o
más acertadamente recombinacióngenética in vitro, ha revolucionado la
biología. El campo de la salud es uno
de los más beneficiados con el
desarrollo de esta tecnología. Las
investigaciones que se realizan en
esta área están enfocadas al
diagnóstico oportuno de
enfermedades, así como su posible
tratamiento a través de la terapia con
moléculas recombinantes e
introducción de genes. Además, la
manipulación de genesproporcionará
en el futuro una herramienta
fundamental para la eliminación de
enfermedades mortales para el
hombre.

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La secuenciación de ADN se
realiza mediante métodos cuya
finalidad es la determinación del
orden de los nucleótidos (A, C, G
y T) en una molécula de ADN. La
secuencia de ADN constituye la
información genética heredable
del núcleo celular, los plásmidos
(bacterias),la mitocondria y
cloroplastos (en plantas) que
forman la base de los programas
de desarrollo de los seres
vivos….

El desarrollo de la
secuenciación del ADN ha
acelerado
significativamente la
investigación y los
descubrimientos en
biología. Las técnicas
actuales permiten realizar
esta secuenciación a gran
velocidad, lo cual ha sido
de gran importancia para
proyectos desecuenciación a gran
escala como el Proyecto
Genoma Humano.

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ADN producido por transcripción
reversa
Los ARN mensajeros (ARNm) transcriptos
en un tejido determinado pueden ser
usados como molde o templado por la
enzima transcriptasa reversa, la cual
produce una copia de ADN (ADNc) a partir
del ARN. A diferencia de los fragmentos de
ADN clivados a partir del genoma por
enzimas derestricción, el ADN producido
por la transcriptasa reversa, debido a que
usa ARNm maduro como templado, no
contiene intrones.
La transcriptasa reversa cataliza la síntesis
en dirección 5' a 3' a partir de oligo- dT
como primer o iniciador.

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Reacción en cadena de
la polimerasa (PCR)
En 1984, Kary Mullis ideó
un ingenioso método para
amplificar secuencias
específicas de ADN que seDenomina Reacción en
Cadena de la Polimerasa
(polymerase chain reaction,
PCR). Mediante esta técnica
se puede amplificar un
segmento específico de
ADN hasta millones de
veces en pocas horas in
vitro, si se conocen las
secuencias colindantes
(flanqueantes) a esta
secuencia blanco.

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CARACTERÍSTICAS
IMPORTANTES DE LA TÉCNICA
No es necesario conocer toda la
secuencia a amplificar,únicamente hay
que conocer las secuencias que
flanquean el fragmento de ADN interés.
La región a amplificar puede ser mucho
mayor que los cebadores. Por PCR se
pueden amplificar fragmentos tan
grandes como 10 kb.

APLICACIONES
La PCR permite amplificar una
secuencia que constituye
menos de la millonésima
parte del ADN total de un
organismo superior. Es una
técnica sumamente sensible,
sepuede amplificar y detectar
una única molécula de ADN.

No es necesario que los cebadores se
ajusten perfectamente a las secuencias
que flanquean el fragmento a amplificar.
El uso de cebadores derivados de un gen
de secuencia conocida hace posible la
búsqueda de variaciones sobre el tema.
Esta característica es muy importante
porque así se han descubierto por PCR
familias de genes yrelaciones evolutivas
entre organismos.

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Clonado de ADN
La primera técnica desarrollada para
amplificar ADN en cantidad es conocida
como clonado. Un fragmento de ADN
obtenido a partir de un organismo (ADN
foráneo) es insertado en un vector (o
transportador) compuesto de ADN, y la
quimera así obtenida (ADN
recombinante) es usada para transformar
células hospedadoras. A medida que...