Biotecnologia

GUÍA N°1 BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL 2012
BIOENSAYO PARA EL MONITOREO DE TOXICIDAD EN SUELO

Introducción:
Los bioensayos de toxicidad son útiles para determinar la toxicidad ambiental de ecosistemas expuestos a un tipo o mezcla de contaminantes. Estos bioensayos consisten en la exposición controlada de un tipo o grupo de organismos vivos al contaminante (que se está estudiando) en estudio. Deeste modo es posible determinar el efecto tóxico que tiene el contaminante sobre alguna propiedad de él o los organismos, como su sobrevida o efectos en el crecimiento.
Es posible hacer bioensayos en todo tipo de organismos (plantas, animales o microorganismos) provenientes de todo tipo de hábitats (terrestres o acuáticos). Sin embargo, es éticamente cuestionable el uso de animales sometidos apruebas que impliquen la exposición a compuestos tóxicos.
En éste laboratorio utilisaremos plantas como organismo biosensible. Analizaremos el porcentaje de germinación, la longitud de la raíz, longitud del tallo, el número de hojas, el peso húmedo y peso seco, y la tonalidad de color en hojas y tallo.
Los organismos utilizados para un bioensayo deben cumplir con los siguientes requisitos:
*Ser de fácil adquisición y cultivo.
* Ser representativos del medio ambiente y de la ventana de tiempo que se desea monitorear. Esto quiere decir que el ciclo de vida del organismo debe contener correspondencia con la temporalidad del fenómeno observado.
* Ser sensibles a la presencia de contaminantes. Los organismos resistentes a los tóxicos quedan fuera del bioensayo.
Para eldesarrollo de este laboratorio usaremos tres plantas distintas, todas ellas fáciles de adquirir y presentes comúnmente en la cocina de nuestros hogares. Escogeremos dos tipos de leguminosas, lenteja y poroto (dicotiledonia) y un grano, que puede ser maíz, trigo o avena (monocotiledonia). Elegiremos según la disponibilidad de ellas. Las semillas se plantarán en tierra esterilizada y pesada, para evitar elcrecimiento de hongos en los cultivos. La tierra será entonces preparada y mezclada con diferentes concentraciones de un contaminante, y se registrarán las observaciones cada dos días. Los contaminantes a utilizar podrán ser aceite quemado, gasolina, ácido acético o detergentes.

Materiales:
Cada alumno dispondrá de un set completo de materiales para realizar el práctico.
* Placas de Petri ocualquier otro recipiente de vidrio o plástico transparente.
* Tierra de hoja de jardinería. Preferentemente comercial, que no posea plagas ni contaminantes.
* Agua purificada.
* Agua destilada o desionizada.
* Fuente de luz y temperatura constante por una a dos semanas.
* Pipetas de 1 y 10 mL.
* Vasos de precipitado o tubos para hacer la dilución de los tóxicos.
*Compuestos tóxicos (bencina, aceite quemado, detergente, vinagre, etc).

Procedimiento:
1) Preparar diluciones en serie de los contaminantes, diluyendo a la mitad secuencialmente con agua destilada, siguiendo el esquema N°1.

1 ml 1 ml 1 ml 1ml 1ml Control sin C.Contaminante Agua Agua Agua Agua Agua
135.6ml (agua) 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 20 ml
4.4 ml (detergente)
Dilución Madre Dilución1Dilución 2 Dilución 3 Dilución 4 Dilución 5 Control


2) Llenar las placas de Petri con la tierra de jardinería.
3) Agregar 20 mL de cada dilución a las placas de Petri. Se deben preparar tres placas de cada dilución (triplicado), correctamente rotulados con el nombre del contaminante, la dilución y fecha.
4) Colocar 4...