biuret

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS MÉTODO DE BIURET

I. OBJETIVOS:

Comprender el fundamento del método de Biuret, así como el manejo de todos los equipos y materiales disponibles para la realización deeste método.
Determinar la cantidad de proteínas que hay en la muestra de soya.

II. FUNDAMENTO
El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dosmoléculas de urea con eliminación de amoniaco.
Si una solución fuertemente alcalina de sulfato cúprico (SuSO4) se añade a una solución de proteína se forma un complejo entre el ion cúprico y los enlacespepiticos, con aparición de una coloración violeta purpura, que representa un máximo de absorción a 540 nm.
CARACTERÍSTICAS MÁS IMPORTANTES DE LA REACCIÓN
La reacción de Biuret se aplica, a partir delos tetrapeptidos, a todos los péptidos y proteínas; su rango de determinación es de 1 a 6 mg/ml. No depende de la composición de aminoácidos. Compuestos con enlaces peptidicos producen un cambiode color de azul purpura cuando reaccionan con Cu (II) en medio alcalino. El compuesto más sencillo que da la reacción es el Biuret, un dimero de la urea que da nombre al ensayo, de estructuraCONH2-NH-CONH2. El ensayo es bastante específico para proteínas pero poco sensible, requiriendo de 1a 10 mg de proteína. Se ha empleado la reacción de Biuret que da una coloración purpura cuando los enlacespeptidicos reaccionan con los iones cúpricos a un pH alcalino y se ha informado que no interfieren pequeñas cantidades azucares reductores (Mitsuda y Mitsunaga, 1974). El método ha sido mejoradoconsiderablemente mediante el uso de propano-2-ol y la aplicación de calor (Noll y cols, 1974).
III. MATERIALES, REACTIVOS Y MÉTODO
Materiales:
Tamiz (60mesh)
Mortero
Espectrofotómetro
AgitadoresBarras magnéticas
Centrifuga
Tubos de ensayo
Pipetas
Reactivos:
NaCl 0,15M
NaOH
Sulfato de cobre
Reactivo de Biuret
Albumina de suero bovina
Método:
Tomar 50gr. De frijol y moler...