Biuret

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
Tecnología Médica
Bioquímica

Informe Laboratorio 1
“Determinación de proteínas
Por el método de Biuret”



INTRODUCCIÓN

Las proteínas son las biomoléculas mas abundantes, están en cada parte de la célula e incluso en una célula pueden haber miles de proteínas diferentes ya queéstas interfieren prácticamente en todo los procesos que en ella ocurren. Podemos definir las proteínas como:* “Un conjunto de biomoléculas que están constituidas a partir del mismo conjunto oblicuo de 20 aminoácidos, unidos de forma covalente en secuencias lineales características”, así las define Lehninger.
Además podemos destacar que las proteínas realizan diversas funciones, intracelulares& extracelulares como por ejemplo: protectora o defensiva (trombina y fibrinógeno), contráctil (actina y miosina), transducción de señales (rodopsina), inmunológica (anticuerpos), homeostática (colaboran en el mantenimiento del pH) & enzimática (sacarasa y pepsina).
Existen diversos métodos para determinar proteínas, el que nosotros utilizaremos para realizar éste laboratorio es elmétodo de Biuret , que nos permite determinar la concentración de proteínas en una muestra determinada muestra,**” basándose en la formación de un complejo coloreado de Cu+2 y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico.1Cu+2 se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y la reacción es bastanteespecífica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda en la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo el suero).
*Objetivos: Conocer los diferentes métodos de cuantificación de proteínas, además de obtener los conocimientos necesarios para comprender los diferentes métodos que existen para determinar proteínas, suutilización e importancia si se quiere conocer su actividad biológica.

*y **:véase en la bibliografía

Materiales

1. Espectrofotómetro ajustado a 546 nm.

2. Cubetas de plástico de 1.5 ml.

3. Material volumétrico: micropipetas de 100µl y de 1000µl, tubos de ensayo.

4. Muestras de suero y estándar de proteínas totales.

5. Reactivo de Biuret.

6. Timer ocronometro.

7. Agua destilada.

Métodos
El práctico consiste en la preparación de 6 tubos de ensayo:

* El tubo 1 contiene 50 µl de agua destilada y 2000 µl de Reactivo de Biuret.
* El tubo 2 contiene 50 µl de Suero Normal y 2000 µl de Reactivo de Biuret.
* El tubo 3 contiene 50 µl de Suero Patológico y 2000 µl de Reactivo de Biuret.
* El tubo 4 contiene 45 µl de Aguadestilada, 5 µl de estándar de proteínas y 2000 µl de Reactivo de Biuret.
* El tubo 5 contiene 40 µl de Agua destilada, 10 µl de estándar de proteínas y 2000 µl de Reactivo de Biuret.
* El tubo 6 contiene 30 µl de Agua destilada, 20 µl de estándar de proteínas y 2000 µl de Reactivo de Biuret.

Luego de haber concluido la preparación de los 6 tubos, se deben sellar y mezclar agitándolossuavemente, luego se debe esperar 6 minutos a temperatura ambiente.
Posterior a ello se colocan en el espectrofotómetro y se lee la absorbancia de cada cubeta, la absorbancia del color producido es leído a 546 nm.

  | Tubo 1 | Tubo 2 | Tubo 3 | Tubo 4 | Tubo 5 | Tubo 6 | Tubo 7 |
Agua Destilada | 50 |   |   | 30 | 20 | 10 |   |
Estándar |   |   |   | 20 | 30 | 40 | 50 |
Proteínas |  |   |   |   |   |   |   |
Suero Normal |   | 50 |   |   |   |   |   |
Suero Patológico |   |   | 50 |   |   |   |   |
Reactivo Biuret | 2000 | 2000 | 2000 | 2000 | 2000 | 2000 | 2000 |

Cálculos absorbancia:
N° de tubo | Concentración | Absorbancia |
tubo 1 |  30.6 % |   515 |
tubo 2 |  15.7 % |   805 |
tubo...