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INFORME DE LABORATORIO No 4:


Cuantificación de proteínas por el método de Biuret









Autores : Carla basaes
Gabriela cabello
Belén Chávez
Carrera : Enfermería
Sección :
Docente : alvaro
Ayudante:




INTRODUCCIÓN
Las proteínas son las macromoléculas biológicas más abundantes en los organismos vivos, están presentes en todas las células y en todas las partes de estas. Las proteínas presentan una gran variedad, ya que cada una puede diferir de la otra, van desde pequeñas cadenas polipeptídicas a grandes macromoléculas de alto peso molecular. Cumplen diferentesfunciones biológicas, como por ejemplo: las proteínas son los instrumentos moleculares mediante los que se expresa la información genética y poseen un importante papel en la regulación del pH .Todas las proteínas están compuestas a partir del mismo conjunto de 20 aminoácidos, unidos de forma covalente en secuencias lineales características (1b).
Al tener las proteínas de un grupo –CO-NH- danpositiva la reacción de Biuret con una intensidad de color que es uniforme para todas las proteínas, ya que depende de un grupo común a todas ellas, y no de las cadenas laterales de los aminoácidos. Es esta la principal ventaja de este método, junto con la sencillez de su práctica experimental y el bajo costo de su reactivo. El principal inconveniente de este método es su sensibilidad relativamentebaja: es aplicable a muestras con cantidades superiores a los 100 μg.
Debido a las ventajas citadas, el método de Biuret se emplea ampliamente en la determinación clínica de proteínas plasmáticas, y muy espacialmente en analizadores automáticos (2a)
OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS:
Conocer algunos métodos de reconocimiento y cuantificación colorimétrica de las proteínas y sus fundamentosteóricos.
Reconocer proteínas mediante la presencia de enlaces peptídicos en soluciones a través del Reactivo de Biuret.
Determinación cuantitativa de la concentración proteica de una solución por el método de Biuret.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Se comenzó el laboratorio rotulando 8 tubos de ensayo, luego se procedió a preparar las soluciones siendo adicionados por las pipetas (1.5 ml y 10ml) y propipetas a los tubos de la siguiente manera: al tubo 1 se le agregó 2.0 ml de Nacl 0.9 % p/v, al tubo 2 se le agregó 1.8 ml de Nacl 0.9 % p/v y 0.2 ml de SAB 5mg/ml, al tubo 3 se le agregó 1.5 ml de Nacl 0.9 % p/v y 0.5 ml de SAB 5mg/ml, al tubo 4 se le agregó 1.0 ml de Nacl 0.9 % p/v y 1.0 ml de SAB 5mg/ml, tubo 5 se le agregó 0.5 ml de Nacl 0.9 % p/v y 1.5 ml de SAB 5mg/ml, tubo 6se le agregó 2.0 ml de SAB 5mg/ml, el tubo 7 se le agregó 2.0 ml de la muestra problema 1 ( orina diluida 1:10) y al tubo 8 se le agregó 2 ml de la muestra problema 2 ( clara de huevo diluida 1:50) . Posteriormente a cada tubo de ensayo se le adicionó 2.0 ml del reactivo Biuret y se dejaron reposar a temperatura ambiente por 5 minutos. Por último se traspasaron a las cubetas de cuarzo ¾ de sucapacidad y se leyó la Absorbancia de los 8 tubos de ensayo en el espectrofotómetro a 540 nm, cabe señalar que el tubo 1 se utilizó como blanco ya que no contenía el analito, permitió colocar el espectrofotómetro en Absorbancia cero a 540 nm.



RESULTADOS:
Una vez que se prepararon las soluciones y se traspasaron a las cubetas de cuarzo se procedió a leer la Absorbancia en elespectrofotómetro a 540 nm , dando los siguientes resultados, el tubo 1 dio de Absorbancia 0, presentaba un color celeste, el tubo 2 dio una Absorbancia de 0.185 presentaba un color violeta (de aquí hasta el tubo 6 se aprecia un aumento gradual del color violeta tornándose más oscuro), el tubo 3 presento una Absorbancia de 0.327, el tubo 5 presento una Absorbancia de 0.397, el tubo 6 presento una Absorbancia...