Bombeo

UNIVERSIDAD DE NARIÑO-PROGRAMA DE MEDICINA

PRACTICA DE BIOQUÍMICA


“ESTUDIO DEL BOMBEO DE PROTONES POR LEVADURAS; efecto de los inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de losdesacopladores

Introducción:

Las levaduras, como todos los organismos vivos, consumen combustibles carbonados para suplir sus necesidades energéticas. Para ello, cuentan con unas etapasenzimáticas de transformación de las mismas, conocidas como vías metabólicas. Una de sus consecuencias de estas transformaciones es el cambio del pH del medio exterior. Además, estos procesos, catalizados porenzimas verse afectados por la presencia de inhibidores enzimáticos.

PROCEDIMIENTO.

Experimento control.

1. Diluya 5 ml de solución de levadura (200 mg/ml) con 40 ml de agua destilada2. Determine el pH de la solución y repita la medición dos veces mas con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal
3. Adicione 5 ml de glucosa al 10%, agite y mida el pH
4.Determine el pH de la solución cada 5 minutos por cuatro veces y luego cada diez minutos dos veces mas


Experimento con dinitrofenol


1. Diluya 5 mL de solución de levadura con 40 mL de aguadestilada
2. Añada por decantación (deslizando por la pared del vaso ¡sin pipetear!) 0.2 ml de una solución de dinitrofenol 40 mmol/L
3. Determine el pH de la solución y repita la medición dosveces mas con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal
4. Esperar 5 minutos
5. repita los pasos 3 y 4 del experimento control

Experimento con azida.

1. Diluya 5 ml de lasolución de lavadura con 40 mL de agua destilada
2. Añada por decantación (¡Sin pipetear!) 0.5 ml de una solución de azida de sodio 400 mmol/L. Agite con cuidado.
3. Determine el pH de la solución yrepita la medición dos veces mas con intervalos de 3 minutos para obtener la línea basal
4. Espere 5 minutos
5. repita los pasos 3 y 4 del experimento control.

Análisis de resultados....