boquimica

Introducción
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una via metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecerincorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de multiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
Se trata de inocular microorganismos en medios de cultivo (sustancias alimenticias preparadas artificialmente) adecuados para observar su crecimiento.
Las mas comunes son:
Catalasa
Citrato
Fenilalanina desaminasa
IndolLactosa
Manitol, Movilidad y Nitratos
Oxidasa
Rojo de Metilo y Voges-Proskauer
Ureasa
Objetivos
• poder identificar -aplicando éste método distintos microorganismos.
• Entender los principios bioquimicos de las pruebas.
• Ser capaces de interpretar adecuadamente los resultados entregados por laspruebas bioquímias
• Conocer el uso de las pruebas bioquímicas para la identificación demicroorganismos
• Identificar errores de procedimiento en el laboratorio al realizar los experimentos y poder reconocer en que partes del procedimiento se cometió el o los errores, para así, mediante el desarrollo experimental conocer mas profundamente las pruebas bioquímicas.








Procedimiento:
Prueba MIO (Motility-Indole-Ornitine ó Motilidad-Indol-Ornitina)
Esta prueba bioquímicapermite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina.
Procedimiento:
Inocular en picada las cepas de micro organimos en el medio de cultivo e incubar por 24 horas a 37° .
Interpretación y Resultados:
Reacción Interpretación
Enturbiamiento del
Agar. Hay movilidad
Agar transparente de-
sarrollo solo en picada No hay movilidadAzul (alcalino) Descarboxila ornitina
Coloración Amarilla (ácido) No descarboxila
Rojo (anillos) Indol (+)
Amarillo (anillos) Indol ( - )

Prueba TSI (Triple Sugar Iron ó Triple Azúcar Hierro)
El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. Tambien permite la identificaciónde la producción de SH2.
Esta es una prueba específica para la identificación a nivel de género en la familia Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre:
• bacterias fermentadoras de la glucosa
• bacterias fermentadoras de la lactosa
• bacterias fermentadoras de sacarosa
• bacterias aerogénicas
• bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgánicas que contengan azufre.Prodedimiento:
Inocular los tubos de TSI con punta (alambre recto). Para eso introducir la punta hasta 3 a 5 mm. del fondo del tubo. Tras retirar el alambre del fondo, estriar el pico con un movimiento hacia uno y otro lado. Incubar a 35° durante 24 horas. Posteriormente se debe medir el pH de los cultivos.




Resultados:
• Pico alcalino/fondo alcalino : no hay fermentación de azucares.Característica de bactrias no fermentadoras como Pseudomonas sp.
• Pico alcalino/fondo ácido : Glucosa fermentada,lactosa ni sacarosa fermentadas. Shigella spp.
• Pico alcalino/fondo negro : Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosa fermentadas, producción de ácido sulfhídrico. Salmonela spp.
• Pico ácido/fondo ácido: Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse SH2 o no.Escherichia coli.
A estos resultados se les agrega el resultado de la producción de gas.
Prueba LIA (Lysine Iron Agar ó Agar Lisina Hierro)
Esta prueba permite diferenciar los microorganimos que producen descarboxilación o desaminación de la lisina. Se pude detectar ademas la produccion de SH2 y es más sensible que el TSI para la detección de SH2. Es muy utilizado par descartar Salmonella de...