Bradford

Determinación espectroscópica de proteínas mediante el reactivo Bradford






Introducción:


Los métodos espectroscópicos permiten estudiar la estructura tridimensional de moléculas biológicas y los cambios conformacionales que ellas experimentan.
Durante los procedimientos de separación de una muestra y obtención de una proteína pura es a menudo necesarioconocer la concentración de proteínas en las sucesivas etapas del proceso. Esto es de particular importancia cuando se está estudiando una proteína con algún tipo de actividad, como por ejemplo las enzimas, para determinar la actividad específica y el rendimiento. Este experimento se realizó mediante el ensayo de proteínas Bradford, que es un procedimiento espectroscópico analítico utilizado paramedir la concentración de proteína en una solución. Es subjetiva, es decir, depende de la composición de aminoácidos de la proteína medida.
Por esta razón, este laboratorio tiene como objetivo aprender a cómo realizar y analizar los resultados de proteínas. Así como desarrollar una curva de calibración utilizando una solución estándar de proteínas. Además el determinar la concentración de unasolución de proteínas desconocidas utilizando la curva de calibración mediante las técnicas de extrapolación y ecuación de la recta es un objetivo también. Y por último realizar una comparación proteica en la leche UHT.







Procedimiento:























Marco teórico:

Las proteínas son moléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. Por suspropiedades físico-químicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas simples (holoproteidos), que por hidrólisis dan solo aminoácidos o sus derivados; proteínas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrólisis dan aminoácidos acompañados de sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores. Las proteínas sonindispensables para la vida, sobre todo por su función plástica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda célula), pero también por sus funciones biorreguladoras (forman parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son proteínas).
Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las biomoléculas más versátiles y diversas. Son imprescindibles para el crecimiento delorganismo y realizan una enorme cantidad de funciones diferentes.
Como todo lo que existe, se deben seguir leyes, y las proteínas siguen la de Beer- Lambert. Esta ley explica que hay una relación exponencial entre la transmisión de luz a través de una sustancia y la concentración de la sustancia, así como también entre la transmisión y la longitud del cuerpo que la luz atraviesa. Si conocemos y α,la concentración de la sustancia puede ser deducida a partir de la cantidad de luz transmitida.
Las unidades de c y α dependen del modo en que se exprese la concentración de la sustancia absorbente. Si la sustancia es líquida, se suele expresar como una fracción molar. Las unidades de α son la inversa de la longitud (por ejemplo cm-1). En el caso de los gases, c puede ser expresada como densidad(la longitud al cubo, por ejemplo cm-3), en cuyo caso α es una sección representativa de la absorción y tiene las unidades en longitud al cuadrado (cm2, por ejemplo). Si la concentración de c está expresada en moles por volumen, α es la absorbencia molar normalmente dada en mol cm-2.
El valor del coeficiente de absorción α varía según los materiales absorbentes y con la longitud de onda para cadamaterial en particular. Se suele determinar experimentalmente. La ley tiende a no ser válida para concentraciones muy elevadas, especialmente si el material dispersa mucho la luz. La relación de la ley entre concentración y absorción de luz está basada en el uso de espectroscopia para identificar sustancias.
Las proteínas se determinan por diferentes técnicas. La utilizada en este experimento...