Bradford3

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD
(no sacar esta hoja)

Blanco: Este tubo no contiene proteína, se reemplaza la muestra por agua y se le agrega el correspondiente volumende reactivo. Se realiza para determinar la absorbancia del reactivo, este valor se descuenta de la absorbancia del resto de los tubos.
Curva de calibración: Para su realización se utilizará lasolución testigo de concentración conocida. Con la medida de absorbancia de cada tubo y conociendo la cantidad de proteínas que contiene cada uno de los tubos, es posible realizar una curva decalibración (gráfico A595 vs (g de proteína). Es necesario realizarla cada vez que se procesen las muestras. La concentración del TESTIGO es 100 (g/ml.
Muestra incógnita: se procesa en simultáneo y en lasmismas condiciones que la curva de calibración. El tubo contiene la muestra y la misma cantidad de reactivos que los anteriores. Para conocer la cantidad de proteínas de la muestra ((g), se determinala absorbancia de la misma y se interpola en la curva de calibración. Cada grupo procesa una sola Muestra incógnita (A o B).

Protocolo:

| | | || | | |
|Tubo |H2O |Testigo |Muestra |Reactivo de |Proteína |Absorbancia |
||((l) |((l) |A o B |Bradford |((g) |a 595 nm |
| | | |((l) |(ml) || |
|Blanco |600 |-------- |---------- |2 | | |
|1 |450 |150|---------- |2 | | |
|2 |300 |300 |---------- |2 | |...