cadena de polimeraza reaccion




universidad católica los ángeles
de chimbote
“año de la inversión para el desarrollo rural y la
seguridad alimentaria”

escuela :enfermería


curso: biología


docente: Rosa Cruz Ojeda


alumna: Jenny Maribel Chavez Maza


tema: reacción en cadena depolimerasa




Definicion de la reaccion en cadena de
polimerasa (PCR)


La reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés
(polymerase chain reaction), es una técnica de biologia molecular desarrollada en 1983 por Kary
Mullis,1 cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular,partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o
molde.
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias cantes de una enfermedad , identificar personas ( cadaveres) o hacer investigación científica sobre el ADNamplificado. Estos usos derivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.



Reactivos

Los 4 desoxirribonucleosídos-trifosfato (dNTP), sustratos para polimerizar nuevo ADN.
Dos cebadores o iniciadores (en inglés, primers), oliglonucleotidos queson, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del ADN. Son secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucleótidos, normalmente de dieciocho a veintidós, que permiten que la polimerasa inicie la reacción. Deben estar enfrentados y a no mucha distancia. Delimitan la zona de ADN a amplificar, es decir, corresponden a los nucleótidos que definen los extremos de la secuencia que se deseareplicar.
Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado comúnmente como cloruro de magnesio (MgCl2), o algún otro catión divalente. También se puede emplear manganeso (Mn2+), para mutagenesis de ADN mediante PCR, ya que altas concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la síntesis de ADN. Actúan como cofactores de la polimerasa.
Iones monovalentes, como el potasioUna solución tampón o buffer que mantiene el PHadecuado para el funcionamiento de la ADN polimerasa
ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasas con temperatura óptima alrededor de 70 °C (la más común es la polimerasa tap.
ADN molde, que contiene la región de ADN que se va a amplificar. .
termocilador, el aparato que mantiene la temperatura necesaria en cada una de las etapas queconforman un ciclo.

Conceptos de la PCR

Sensibilidad: se refiere a la cantidad mínima de ADN necesaria para que se produzca la amplificación, es decir, para obtener una banda. Se relaciona con los falsos negativos, ya que puede que una muestra sea positivas pero sea dada como negativa porque no se ha amplificado por no tener suficiente cantidad de ADN.
Especificidad: se refiere ala obtención de un solo producto amplificado. Viene determinada por los oligos y la especificidad con la que se unen al ADN molde. De esta forma, si los oligos tienen más de un sitio al que se pueden unir aparecerá más de un producto amplificado.
Eficiencia: se refiere a la amplificación máxima que se puede obtener en un número determinado de ciclos.
Fidelidad: se refiere a los errores quecomete la ADN polimerasa durante la amplificación. Este concepto es de especial importancia en la secuenciación, pero en otros casos no es tan importante. Una buena fidelidad permite evitar falsos positivos y/o negativos.


Tipos de PCR


PCR anidada

Técnica muy sensible de PCR en la que el producto de una amplificación es utilizado como molde para realizar...