Calcofluor. Tinción De Celulosa

Calcofluor White M2R. Tinción de celulosa (y quitina).
El Calcofluor White es un fluorocromo inespecífico que se enlaza a la celulosa y a la quitina de las paredes celulares. Se puede emplear parala detección rápida de levaduras, hongos y parásitos en tejidos. Cuando se emplea la luz UV, las paredes fúngicas fluorescen de color entre verde brillante y azul, mientras que otros materialesfluorescen de color rojizo-anaranjado. Cuando se emplean muestras de tejidos ricos en celulosa aparece un background que puede interferir con las hifas fúngicas. Para disminuir este fondo puede emplearsecomo colorante de contraste el Azul Evans y la luz azul en lugar de la UV.
Aplicaciones:
* Aplicable a todo tipo de secciones.
* Microscopía de epifluorescencia (cubos U-MWU2, UV; y U-MWBV2,azul).
Método (1):
1. Mezclar una gota de la solución de Calcofluor White con una gota de la solución de KOH sobre la sección a teñir.
2. Tapar con un cubre (eliminar el exceso de líquido),dejar 1 min y observar con el cubo U-MWU2
Método (2):
1. Mezclar una gota de la solución modificada de Calcofluor White con una gota de la solución de KOH sobre la sección a teñir.
2. Tapar conun cubre (eliminar el exceso de líquido), dejar 1 min y observar con el cubo U-MWBV2
Soluciones:
* Solución de Calcofluor White M2R: 0.1 g en 100 mL de agua destilada
* Solución modificadade Calcofluor White M2R: 0.1 g de calcofluor White + 0.05 g de Azul Evans en 100 mL de agua destilada.
* Solución de Hidróxido Potásico al 10%: 10 g de KOH en 100 mL de agua destilada
Reactivos:* Calcofluor White M2R (Calcofluor White M2R; FLUKA: 18909)
* Azul Evans (Evans Blue; FLUKA: 46160)
* KOH (KOH; PANREAC: 211514)
Referencias:
* Forbes, B.A., Sahm, D.F. &Weissfeld, A.S. (1998). Bailey and Scott's diagnostic microbiology, 10th ed. St. Louis, Mosby,
* Green, L.K., Cowan, D.F. & Moore, D.O. (1988). Examination of tissue for parasites by fluorescent...