calculo

Proteínas:
Métodos para su
Estudio

Propiedades Espectroscópicas
• Todos los aminoácidos
absorben luz en la región
infraroja
• Sólo Phe, Tyr, & Trp absorben
UV
• Absorbancia a 280 nm es unbuen diagnóstico para
aminoácidos

Medida de absorbancia en un espectofotómetro

Separación de Aminoácidos
• Mikhail Tswett, botánico ruso, separó
pigmentos coloreados de plantas por‘cromatografía’
• Existen muchos métodos cromatográficos
para separar mezclas de aminoácidos
– Cromatografía de intercambio iónico
– Cromatografía líquida de alta performance
(HPLC)

Cromatografía encolumna

Cromatografía de Partición / Tamiz molecular

Mezcla de proteínas es añadida a
la columna la cual contiene un
polímero
Moléculas de proteínas se separan en
base a tamaño; las másgrandes es
añadida a la columna la cual cpasan
más libremente y aparecen en las
primeras fracciones

Cromatografía de Intercambio Ionico

Perlitas del polímero
tienen grupos cargados
positiva(int. aniónico) o
negativas (int. catiónico)
Mezcla de proteínas es
añadida a columna con
intercambiador (cat)

Proteínas se mueven por la columna a velocidades determinadas por su carga neta alpH
que se está usando. En el intercambiador catiónico, las proteínas con mayor carga
negativa se moverán más rápido y eluirán antes

Intercambiador catiónico:
La resina tendrá carga
negativa eintercambiará
cationes (p. ej. Na+) por un
aminoácido cargado
positivamente
p.ej. Carboximetil celulosa

Muestra
Conteniendo
varios aa.
Columna
conteniendo
resina de
intercambiocatiónico

Elución separa
aa en bandas
discretas

Cromatografía de Afinidad

Electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones denaturantes
(SDS-PAGE)

Luego de la tinción : con nitrato deplata o Azul de Coomassie

Determinación de peso molecular aprox.de una proteína (Mr)

Isoelectroenfoque : Separación de proteínas en base a su
punto isoeléctrico
Primer paso para la...