Calibración De Micropipetas

1. Objetivo.

Conocer las partes y el funcionamiento de las micropipetas; adquirir destreza en la utilización de pipetas para la medición de volúmenes entre 1 y 1000 μL.
Calibrar las micropipetas disponibles en el laboratorio.

2. Introducción.

En bioquímica, la habilidad para medir de manera exacta y reproducible y transferir volúmenes pequeños de líquidos son críticos paraobtener resultados útiles. Para los volúmenes menores de 1 mL, el método más común para medir líquidos requiere el uso de un dispositivo conocido como micropipeta.
El éxito, en parte de las técnicas moleculares radica en el buen funcionamiento de las micropipetas y en la adecuada conservación tanto de la muestra como del reactivo.
Las   micropipetas   son   dispositivos   que   permiten   medir  volúmenes   pequeños   que van desde 1 μl hasta 1 ml o más. Al igual que las pipetas éstas pueden ser para contener o para verter volúmenes. Utilizaremos micropipetas para verter, ya sea un volumen fijo o un volumen variable. En las de volumen variable, se puede seleccionar un volumen dentro de un rango de valores determinado. La micropipeta más comúnmente usada en los laboratorios de análisisfue introducida por la compañía Eppendorf y este nombre se adoptó de forma genérica para estos dispositivos,   aunque   hoy   en   día
  existen   una   gran   cantidad   de   compañías   y modelos similares que funcionan bajo un mismo principio de pistones para operar. Por   lo   tanto,   es   aconsejable   consultar   las   instrucciones   del   fabricante   sobre   el empleo correcto de cadamodelo. Sin embargo, todas ellas utilizan puntas o “tips” descartables   plásticos   que   se   ajustan   al   extremo   de   la   micropipeta.   En   estas puntas de plástico es donde se deposita el líquido a medir.

Partes de una micropipeta: en la imagen se pueden ver las partes que conforman a las micropipetas, es necesario conocerlas para saberel uso de éstas.

3. Fundamento del método.

Por calibración de micropipetas se entiende la comparación de volumen real y volumen teórico. El volumen real se determina por vía gravimétrica. El peso obtenido se corregirá con la densidad, dependiendo de la temperatura. Con el peso ya corregido se obtendrá el volumen real. Los datos se representan gráficamente y se obtiene el coeficiente decorrelación, que nos indicara si la micropipeta está correctamente calibrada a sus distintos volúmenes.

TIPOS DE MICROPIPETAS
Normalmente nos encontraremos los tipos: P1000, P200, y P20.
P1000 es útil para volúmenes de 200 hasta 1000 μL
P200 es útil para volúmenes de 20 hasta 200 μL.
P20 es útil para volúmenes de 0.5 hasta 20 μL.

MANEJO DE LA MICROPIPETA
Llenado de la pipeta* Colocar el pulgar sobre el mando o émbolo de pipeteado.
* Oprimir el émbolo. Cuando el émbolo se presiona sentirá un punto de resistencia. Éste es el primer “alto” o "tope". Si continúa presionando encontrará un punto donde el émbolo ya no se mueve hacia abajo, este corresponde al segundo “alto” o "tope".
* Oprimir el émbolo hasta el primer tope y colocar la punta dentro del líquidohasta una profundidad de 2 a 3 mm. De una manera lenta y controlada, disminuya la presión del émbolo para permitir que se desplace hacia arriba. No suelte el émbolo abruptamente, al permitirlo causará que el líquido pueda salpicar dentro de la punta produciendo volúmenes inexactos y generando contaminación de la pipeta. Una vez el émbolo se haya desplazado hasta arriba mantenga la micropipeta en ellíquido durante un segundo, esto evita que se aspire aire en la parte final.
Expulsión de la muestra
* Llevar la micropipeta al envase en el cuál quiere añadir el líquido. Se apoya la punta en la pared del recipiente sin evitar la salida de la muestra.
* Oprima el émbolo hasta el primer tope y luego hasta el segundo tope. Haga este procedimiento a una velocidad moderada, hacerlo muy...