Cantaje Celular

Práctica 15. Conteo de células con ayuda de la cámara de Neubauer
CUESTIONARIO PREVIO :
Què es la cámara de Neubauer?
Què tipo de células se pueden contar con este dispositivo?
Què otras técnicas existen para el contaje celular?
INTRODUCCIÓN
En Biología Celular es común el encontrarse con la necesidad de conocer el número de células que presentes en un volumen dado; por ejemplo, cuando serealizan cultivos celulares se precisa saber cuantas células se encuentran en un momento x (t1) con respecto al número de células que inicialmente se sembraron (t0). O bien, para saber cuantos espermatozoides hay en los eyaculados de diferentes pacientes. En tales casos se requiere de un instrumento que permita contar directamente, o bien, calcular la concentración celular en un medio.
Pararesolver el problema de conteo celular, se ha optado, en alguno casos, por calibrar sistemas espectrofotométricos, cuyo fundamento se finca en las propiedades de absorción de la luz por parte de las células; sin embargo, tales sistemas son poco exactos y los resultados que se obtienen son difíciles de repetir. Una alternativa a este problema es el contar directamente el número de células presentes enun volumen conocido; esto puede ser un trabajo agobiante si consideramos, por ejemplo, a las células procariontes, las cuales miden generalmente menos de 10 micras (>1X10-6 metros o 1X10-3 milímetros o bien 0.010 milímetros -revisar el anexo A para saber más acerca de las unidades de medidas utilizadas comúnmente en Biología Celular) y por lo tanto se pueden encontrar muchísimas en un volumenmuy pequeño. No obstante, se cuenta con la cámara de Neubauer, la cual es un instrumento muy útil que permite contar células de distinto tamaño.
La cámara de Neubauer tiene la apariencia de un portaobjetos grueso, que en una cara tiene una placa muy delgada de metal, la cuál se encuentra grabada con un par de cuadriculas muy finas y de medidas definidas (Figura 1, poner una fotografía .- unafotografía de la cámara completa y una desde la vista del microscopio para apreciar la cuadrícula, hacer el pie de figura-). La cámara de Neubauer cuenta también con un par de muescas que permiten colocar la muestra a analizar en dos compartimientos. Por último, la cámara de Neubauer se complementa con un cubreobjetos cuyo grosor es mayor, también, que el de los cubreobjetos convencionales.Entonces, la altura entre el portaobjetos y el cubreobjetos se encuentra definida, así como el área de la cuadricula en el portaojetos; por lo tanto, es posible calcular el volumen contenido en cada compartimiento de la cámara de Neubauer. De esta manera, es posible conocer el volumen de muestra celular que se coloca en la cámara, ahora solo resta conocer el número de células presentes en ese volumen.OBJETIVOS.
1. Que el alumno conozca y practique el uso correcto de una cámara de Neubauer
2. Que el alumno se ejercite en los cálculos necesarios para estimar el número celular de una suspensión celular.

MATERIAL Y METODO

Material | Reactivos |
Probeta 100 ml | Agua destilada |
Cámara de Neubauer | Azul de metileno |
Micropipeta de 100 | |
Microscopio | |
Vaso Precipitados 250ml | |
Pipata pasteur | |

MÉTODO.

Diluir en 100 ml de agua destilada un gramo de levadura seca comercial, agitar hasta que la muestra se vea homogénea. Pipetear 100 µl de la muestra celular con una micropipeta y colocar en una muesca de la cámara de Neubauer y permitir que la suspensión ingrese a la cámara por capilaridad. Evitar que se formen burbujas. Colocar la cámara en la platinade un microscopio de campo claro con iluminación Kohler y utilizar el objetivo de 10X para localizar el cuadro central de la cámara. La cuadrícula que se utiliza como guía para el conteo es la e 0,2 X 0,2 mm. Tener cuidado de no contar dos veces la misma célula. Para conocer el número de células en la muestra original realizar el siguiente calculo: A X B X C
Donde A= de células en la cámara...