Capitulo5 Capitulo5 Procedimientos De Laboratorio

5. MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Y MÉTODOS:

5.1 MATERIALES UTILIZADOS:

5.1.1Reactivos y solventes:

Acetato de Etilo
Acetona
Hexano
Agua destilada
Metanol
Cloroformo
Etanol
Reactivo de Hager
Reactivo de Mayer
Reactivo de Wagner
Reactivo de Dragendorff
Reactivo de Rosenthaler
Reactivo gelatina
Acido clorhídrico 1%, 2N,
Cloruro de sodio
Anhídrido acético
Cloruro férrico
Amoniaco
Viruta demagnesio amalgamado

Hidróxido de sodio 2N
Polvo de zinc
Ácido sulfúrico concentrado y al 50%
Solución al 5% de nitroprusiato de sodio
TMS como referente
Metanol deuterado
Cloroformo deuterado
Silica gel
Yodo
Papel filtro

5.1.2 Instrumentos y aparatos:

Balanza granataria
Licuadora
Rotavapor Büchi R-124
Baño de agua Büchi B-480
Aparato de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) Varian Gemini 2000 de 200MHz
Aparato de destilación
Bomba de vacío
Columnas para cromatografía de cristal
Placas cromatográficas
Lámpara de UV
Material de vidrio Pirex
HPLC

Liofilizador

5.2 Pruebas fitoquímicas preliminares:

Alcaloides:

Una porción del residuo, una punta de espátula, se disuelve en 2mL de ácido
clorhídrico al 50%, se agita y se filtra hasta que el filtrado sea completamente
transparente. Se toma unaalícuota del filtrado para cada ensayo con los reactivos para
alcaloides; Mayer, Dragendorff, Wagner y Hager. Se considera como positiva las
pruebas en las que aparece un precipitado (Domínguez, 1973).

Saponinas:

Ensayo con agua caliente.
Una porción del residuo de aproximadamente 10mg se coloca en un tubo de
ensaye, para disolverlo se le agrega agua caliente (40 °C), se dejó reposar durante 15a
30 minutos y luego se agitó manualmente durante 1 a 2 minutos. La formación de
espuma con apariencia de panal de abeja se considera positiva (Domínguez 1973).

Rosenthaler:

A otra porción del residuo (10mg aprox.) se añade una gota del reactivo de
Rosenthaler y una gota de ácido sulfúrico concentrado. Las saponinas dan un color
violeta (Fragoso, 2001).

Triterpenos:

Se disuelve en un tubo deensaye una porción del residuo de aproximadamente
una punta de espátula en 1mL de cloroformo. Se agrega resbalando por las paredes,
1mL de anhídrido acético y se deja reposar en frío. La aparición de colores rojo, rosa,
verde, púrpura o azul en la interfase cuando se añaden 1 o 2 gotas de ácido sulfúrico
concentrado, se considera positiva (Fragoso, 2001).

Taninos:

Se disuelve en agua 100mg deresiduo; se filtra y se toman alícuotas de 1mL
para las pruebas de cloruro férrico y reactivo gelatina en ambos casos se considera
positiva la aparición de un precipitado (Fragoso, 2001).

Flavonoides:

Reacción con vapores de amoniaco:

Una porción del residuo de 10mg se diluye con suficiente etanol hasta verse
transparente. Se impregna en una tira de papel filtro con el extracto diluido y sedeja

secar a temperatura ambiente, posteriormente se somete a la acción de vapores de
amoníaco durante 2 minutos. La aparición de una coloración amarilla ocre se considera
positiva (Fragoso, 2001).

Shinoda:
A un tubo con 1mL del extracto diluido se le agrega un trocito de viruta de
magnesio amalgamado y cinco gotas de ácido clorhídrico concentrado. La aparición de
colores que van del rojo a magentaindica la presencia de una flavanona o
dihidrofalvanol (Fragoso, 2001).

Pew´s:

A un tubo con el extracto diluido se le agrega polvo de zinc y unas gotas de
ácido clorhídrico 5N. Sólo los dihidroflavonoles reaccionan para dar colores que van del
rojo púrpura al rojo cereza. Flavononas, dihidrochalconas y otros flavonoides dan
coloración rosa o café.

Glucósidos cardiotónicos y lactonassesquiterpénicas:
Legal:

A una porción del extracto a analizar, se le agregan dos o tres gotas de piridina,
después se añaden, una gota de solución reciente al 5% de nitroprusiato de sodio en
agua y 3 gotas de NaOH 2 N, se considera positiva cuando aparece un color rojo
intenso.

Preparación de reactivos:

Reactivo de Hager: solución saturada de ácido pícrico en agua.
Reactivo de Mayer: En un matraz...