CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA Y FÍSICA DE UN DNA RECOMBINANTE

PRÁCTICA 6
CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA Y FÍSICA DE UN DNA RECOMBINANTE


OBJETIVOS
Obtener DNA de doble cadena del plásmido Pcr2.1TOPO, recombinante y no recombinante
Obtener célulascompetentes de E. coli y transformarlas.
Diferenciar un vector recombinante de uno no recombinante por pruebas fenotípicas y de restricción.


RESULTADOS

Tabla 1: Crecimiento de colonias de célulasde E. coli transformada con el plásmido Pcr2.1-TOPO y Pcr.2.1-TOPO-ape
Tubo
UFC /mL
1
0
2
0
3
32
4
43
5
34
6
55

Tabla 2: Marcador de tamaño molecular. Fago λ digerido con Hind III.Banda
Tamaño (pb)
Log del tamaño
1
23,130
4.3641
2
9,416
3.9738
3
6,557
3.8167
4
4,361
3.6395
5
2,322
3.3658
6
2,027
3.3068
7
564
2.7512
8
125
2.0969


Grafica 1: Curvatipo del los fragmentos del DNA del fago λ utilizado como marcador de tamaño molecular.


























Figura 3.- Electroferograma proporcionado


DISCUSIÓNEn la Figura 1 y 2 se muestran los electroferogramas obtenidos de los digeridos de cada plásmido con cada enzima utilizada, pero para realizar la gráfica y determinar la talla molecular se tomó comoreferencia un electroferograma proporcionado por los profesores, ya que el marcador de peso molecular que se utilizó en la práctica, no fue el DNA del fago λ digerido con Hind III, esto se observa yaque las bandas obtenidas en el electroferograma no corresponden a las esperadas.
En cambio en el electroferograma obtenido…..

CONCLUSIONES
Se obtuvo DNA de doble cadena del plásmido Pcr2.1TOPOno recombinante y Pcr2.1TOPO-ape no recombinante.
Se obtuvieron células quimiocompetentes de E. coli utilizando CaCl y se transformaron utilizando el plásmido Pcr2.1TOPO y Pcr2.1TOPO-ape.
Sediferenciaron los dos plásmidos uno recombinante y uno no recombinante fenotípicamente a partir de las colonias desarrolladas por la células transformadas. También se diferenciaron los dos plásmidos...