caracterización fenotipica y física de DNA recombinante

La ingeniería genética se define como el conjunto de técnicas empleadas para introducir DNA foráneo o extraño a una célula y lograr que se replique y/o exprese enella.
Para que el DNA foráneo se replique, se requiere que esté integrado en un replicón, este replicón recibe el nombre de vector o vehículo de clonación. Por otrolado, para que el DNA extraño se exprese, debe ser integrado a un vector que recibe el nombre de vector o vehículo de expresión.
Los replicones que se han empleado comovectores son los plásmidos y los fagos como λ y M13; además, se cuenta con otros vectores que se han construido empleando parte de los vectores naturales (plásmidos yfagos), como los cosmidos y los fasmidos.
En forma resumida, los ´pasos que se requieren para que se pueda introducir un DNA extraño a Escherichia coli son lossiguientes:
Obtener el DNA que interesa (mediante PCR, digestión con enzimas de restricción o incluso la síntesis química del gen).
Introducir el DNA de interés en unvector, mediante el corte de este y del vector con enzimas de restricción y la unión de los dos DNAs con la enzima T4 DNA ligasa.
Obtención de las células huésped enestado de competencia.
Selección de las clonas recombinantes, de acuerdo a los marcadores que posee el vector o vehículo de clonación o expresión.
Como se indicó, elfago M13 es un vector que se emplea frecuentemente en experimentos de ingeniería genética. Este fago tiene como material genético una molécula de DNA circular de cadenasencilla, pero durante su ciclo replicativo se presenta como un DNA circular de cadena doble que en etapa posterior da nuevamente DNA genómico de cadena sencilla.