Caracterizacion De Enzimas

CARACTERIZACION DE INULINASA DE Kluyverumices fragilis CDBL-278 Y DE INVERTASA DIE Saccharomyces cereviseae POR DICROISMO CIRCULAR Presenta Miguel Angel Zavala Sánchlez para obtener el grado de Maestro en Química

Esta se tésis realizó en el área de Biofisicoquímica, Departamento del de Química la de 'Universidad Autónoma Metropolitana Un.idad Iztapalapa, bajo la Dirección del Dr. AndrésHernández Arana.

. . ..

AGRADECIMDENTOS

Andrés,

Por tu apoyo y dirección la tesis de Por estar los momentos tiifides y tu gran ayuda en

Alejandro, Salvador,

Por los tips y tu gn apoyo a Por tu interés y motivaciónpara lograr esta meta

saw

ANTECEDENTES Las enzimas que hidrolizan los enlaces del tipo p-hctosídico hansido clasrficadas en dos tipos:invertasas (p-D-fructo-hanosidohctohdrolasas EC.3.2.1.26), que hidrolizan la sacarosa a glucosa:y fructosa; e inulinasas (2-pD-fructan fiuctohtdrolasasEC. 3.2.1.7), las cuales actúan principalmente sobre polímerosde hctosa, perotambiénpresentanactividad Ambas clases deenzimaspresentan decir, son glicoproteínas. La producción de estas dos clases glicoproteínas diferentes de por microorganismos es conocida desde hace mucho tiempoy se ha determinado que está asociada al crecimiento celular del microorganismo sobre diferentes
.

sobre la sacarosa.

un altocontenidodecarbohidratos,es

tipos de sustratos como la sacarosa

y algunas D-fructanas. Estas proteínas son
presientan

'

funcionalmente sudares; embargo, sin como es el caso de la inulina obtenida la de

diferencias la en

especlfcidad para degradarpolimeros de hctosa de elevado peso molecular,

dalia, la consiste cual de
es

aproximadamente 28 a 30 residuos de hctosa unidos por meQo de enlaces glucosídicos y un residuo de glucosa termml. La hidrólisis de la inulina aunque muy lentamente, por las invertasas producidas por algunos microorganismos.Debido a loanterior,laclasificación enzimashasidoobjetodediscusiÓnly2.Se de ambostiposdegeneralmente catalizada por las inulinasas, pero, también puede ser catalizada,

ha cutestionado la posibilidadde

considerar a la inulinasa como un tipo especial deiinvertasa o como un tipo de enzima totalmente diferente, con un modo de acciOn análogo. Para drferenciar la actividad enzimática de inulinasa de la de invertasa se usa comúnmente la relación S/I (actividadrelativasobresacarosa

einulina),sinembargo,éste
las

métodode Merenciación no se considerasuficienteyaquedependede condiciones en las que se determine la actividad emimática.
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Estudos realizados sobre la bioquímica de las inulinasas producidas por
diferentes microorganismos demostraron tienen que misma éstas la especlficidad el de por sustrato, tipo pero En de invertasas, el las caso muestrin diferenciasla en seprobó que en la producida por la estabilidad, pHy temperatura óptimos para actividad enzimática3.

Saccharomycescereviseae existendiferenciasestructuralesentrelaenzima
y excretada al medio de cultivo la retenida en la pared celular4.

Tantolasinulinasascomolasinvertasas

han sidoobjetodenumerosos

estudos acerca de su producción, puIlficación, canacterización química fisica y
y usos anivel industrial. Sin embargo, en la actualidad los estudios acerca de la

estructura de las inulinasas son muy limitados y no existe invertasa). En el presente trabajo comparativodeambasclases

un estudto

comparativo entre las posibles conformaciones de-ambas enzimas (inulinasa e

se pretendecontribuirconel
de enzimasporloque

estudo estructural

se proponeobtenerla

enzimainulinasa asociada a la pared de la levadura Kluyveromices ji-agiZisJ , determinar el efecto de la temperatura del pH sobre la estabilidady actividad y enzimática de la inulinasa, purificar la invertasa de! Saccharomyces cereviseae
y caracterizar ambas enzimas medio es;pectroscopía dicroísmo por de de

circular, para determinar si están no estructuralmente relacionadas. o

'Actualmente la...