Carbohidratos_en_planta 1

PNT Nº 20 (Revisión 1)
Fecha: 25/02/2011
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TÍTULO: Determinación de carbohidratos en muestras vegetales mediante cromatografía
iónica
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1.- INTRODUCCIÓN
El presente protocolo es aplicable para el análisis cuantitativo de algunos azúcares y
polialcoholes en muestras de vegetales. Los analitos son extraídos de lamuestra por medio de
agua desmineralizada y analizados mediante cromatografía iónica.

2.- PRINCIPIO
Los carbohidratos objeto de este protocolo, son extraídos de la muestra fresca por medio
de agua desmineralizada o de una mezcla alcohol/agua y analizados mediante cromatografía
iónica, utilizando una columna de intercambio aniónico, con grupos cambiadores de amonio
cuaternario, y un sistema dedetección amperométrico.

3.- MATERIAL
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Jeringas de plástico de 1 y 25 ml.

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Matraces aforados de 10, 25 y 50 ml.

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Pipetas graduadas de 2 ml.

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Morteros de porcelana de 50 mm de diámetro.

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Vasos de precipitados, pipetas Pasteur y otro material general de laboratorio.

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Columna para cromatografía iónica de 25 cm de longitud y 4,6 mm de diámetro
interno, empaquetada con un resina cambiadora de estireno/divinilbenceno con
funcionalización de amonio cuaternario (CarboPack PA-1, RCX-10, o
equivalentes).

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Precolumna para cromatografía iónica adecuada para lacolumna analítica a
utilizar (CarboPack PA-1, RCX-30, o equivalentes).

El material a utilizar deberá estar completamente limpio, debiendo enjuagarse
previamente a su utilización.
El material volumétrico a utilizar deberá ser siempre de clase A.

4.- APARATOS

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Generador de ultrasonidos, con una potencia mínima de 300 W.

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Placa calefactora.

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Cromatógrafo iónico equipado con una bombaanalítica capaz de realizar, al
menos, gradientes binarios y un detector amperométrico (ver nota 8.2).

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5.- REACTIVOS
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Agua desmineralizada, de calidad ISO tipo 1 (Milli Q oequivalente).

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Disolución de hidróxido sódico 1 N (ver nota 8.3).

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Alcohol etílico absoluto.

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Glicerol.

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Manitol.

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Trehalosa.

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Glucosa.

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Fructosa.

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Sacarosa.

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Columnas para extracción en fase sòlida preempaquetadas con 250 mg de carbón
grafitizado (Supelclean ENVI-Carb SPE o equivalentes).

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Filtros de nylon de 25 cm de diámetro y 0,45 μm de tamaño de poro.

Todos losreactivos a utilizar deberán ser de calidad P.A.

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6.- PROCEDIMIENTO
6.1.- PREPARACIÓN DE LAS DISOLUCIONES PATRÓN
Pesar aproximadamente 50 mg de cada una de las substancias patrónindividuales y
disolver cada una de ellas en 50 ml de agua desionizada, para obtener una serie de disoluciones
iniciales de aproximadamente 1 mg/ml; combinar 5 ml de cada una de las disoluciones
individuales en 50 ml de una disolución mezcla inicial de trabajo que contenga aproximadamente
100 μg/ml de cada uno de los compuestos individuales.
Preparar series de patrones a partir de la disolución inicialde trabajo, hasta
concentraciones de aproximadamente 3 μg/ml, para realizar las rectas de calibración..

6.2.- PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

6.2.1.- Preparación de muestras de líquenes
Pesar 500 mg de la muestra en un vaso de precipitado de 25 ml; añadir sobre ella 5 ml
de agua desmineralizada.
Agitar la suspensión de la muestra durante 3 minutos en un baño de ultrasonidos y, a
continuación,...