Cardioversión eléctrica

Práctica 9: 2008.01.10
ELECTROFORESIS PARA SEROPROTEÍNAS

FUNDAMENTO
Se basa en la separación de sustancias con carga, y dependiendo de su carga migrarán más o menos. Luego con ayuda de un densitómetro tendremos los resultados, diferenciando cada seroproteína.
MATERIALES
-KIT RAL
-Micropipeta
-Puntas de micropipeta
-Cubeta de electroforesis
-Densitómetro
MUESTRAS Y REACTIVOS
-Tampónelectroforesis
-Transparentadores
-Diluyentes
-Muestra: Suero Marta
TÉCNICA
Montar las cubetas de electroforesis con su soporte y llenando de tampón hasta cubrir los electrodos. En el soporte poner una tira de acetato de celulosa, mientras que se dispensa la muestra en una tira del KIT, a la que con el dispensador se cogerá y dispensará paralelamente lo más cerca del ánodo posible. Seconecta la cámara y se pone la tapa. Se esperan 40-45 minutos a que migre, y una vez pasado este tiempo se colorea la tira con rojo Ponceau durante 5minutos. Se decolora unas cuantas veces y se echa el transparentador y se deja en estufa sobre un vidrio a que seque.
Por último solo queda ver la tira en el fotodensitómetro que nos dirá que seroproteínas aparecen.


RESULTADOS
Después de realizarvarias mediciones los resultados nos dicen que la seroproteína de mayor cuantía es la albúmina, seguida de la α1 y β, luego γ y por último α2.


PRÁCTICA 10: 2008.01.14
GLUCOHEMOGLOBINA HbA1 TEST

FUNDAMENTO
Este es un método de separación mediante resina de intercambio iónico. La determinación de glucosa en sangre es una de las determinaciones más importantes. La hemoglobina glucosadapuede dividirse en HbA1a, HbA1b y HbA1c, siendo esta última la usada en prácticas por presentar mayor porcentaje de glucosa. Normalmente se tiene un porcentaje de glucohemoglobina en sangre menor del 7%, pudiendo aumentar en diabetes mal controladas o con metabolismo desequilibrado.
MATERIALES
-Cubetas
-Fotómetro
-Tubos de vidrio
-Gradilla
-Micropipeta
-Puntas pipeta
-Cronómetro
-Eppendorf-Vórtex
-Kit GlucoHbA1-Test
MUESTRA
-Sangre con EDTA (2008.01.10)
TÉCNICA
HEMÓLISIS
Se echan 500µL de sustancia hemolizante en los Eppendorf, más 100 µL de sangre con EDTA para el tubo muestra y 100 µL de estándar reconstituido para el patrón. Se mezcla bien y se deja reposar 5 minutos.
DETERMINACIÓN DE HbA1
De los tubos de muestra y patrón se cogen 100 µL y se depositan en los tubosmuestra y patrón con resina. Se pone el émbolo a 1 cm del líquido y agitamos con ayuda del vórtex a intervalos de 5minutos. Se presiona el émbolo hasta presionar bien la resina, vertiendo el sobrenadante dentro de las cubetas espectrofotométricas. A continuación se mide la Absorbancia a 415nm.
DETERMINACIÓN DE Hb TOTAL
Se rotulan dos tubos de vidrio con muestra y estándar y se pipetean 20 µL dehemolizado de la hemólisis. Se agregan 5mL de agua destilada y se mezcla. Se vierte en una cubeta y se lee la absorbancia.
RESULTADOS
HbA1c: Estándar 0.107 // Muestra 0.083
Hb total: Estándar 0.109 // Muestra 0.208

Para hallar el factor F
F=AHbtotal STD×%HbA1 STDAHbA1 STD

F=0.109×7.5%0.107=7.64
Para hallar el % de glucohemoglobina

%HbA1=F×AHbA1 muestraAHb total muestra%HbA1=7.64×0.0830.208=3.048

El resultado nos dá un dato ligeramente menor de lo normal.

PRÁCTICA 11: 2008.01.16
PCR

FUNDAMENTO
La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica de biología molecular con la cual, a partir de una pequeña muestra de ADN se pueden obtener un gran número de copias.
MATERIALES
-Cóctel PCR
-Tampón
-Nucleótidos trifosfato
-primers
-MgCl
-Polimerasa
-Agua
TÉCNICAPara la PCR manual se usarán unas ollas, con distintas temperaturas para desnaturalizar y renaturalizar. Se calculan los ciclos y se van pasando los tubos de una olla a otra.
Usando el termociclador, este se programa según el número de ciclos y los tubos se retiran al ciclo deseado. Se retiran los tubos, uno a los 10 ciclos, a los 15 y el último a los 20 (la cuenta de ciclos va marcha atrás)....