Cariotipo

PRÁCTICA: Cariotipo

I. Objetivos
Realizar cariotipo a partir de una muestra de sangre

II. Fundamento
El cariotipo es un esquema, foto o dibujo de los cromosomas de una célula metafísica(usualmente linfocitos de sangre periférica) ordenados de acuerdo a su morfología y tamaño, que están caracterizados y representan a todos los individuos de una especie. El cariotipo es característico decada especie: el ser humano tiene 46 cromosomas (23 pares), organizados en 22 pares autosómicos y 1 par sexual (hombre XY y mujer XX).
El cariotipo se realiza en un medio PB-MAX para procedimientoinvitro que requiere el cultivo a corto plazo de linfocitos.

III. Materiales
* Medio PB-MAX
* Medio RPMI
* Suero Fetal
* Fitohemaglutinina
* Colchina
* KCL
*Solución Fijadora
* Colorante de Giemsa
* Gotero
* Muestra de sangre
* Incubadora
* Tubos de ensayo cónicos con tapón
* Centrifuga
* Portaobjetos

IV. Procedmiento
1. Setoman 2cc de sangre con heparina de amonio y en caso de no procesar de inmediato se debe de refrigerar

2. SEMBRAR
a. Poner 5 ml de medio de cultivo de trabajo a cada tubo
b.Agregar 0.1 ml de fitohemaglutinina
c. Agregar 10-15 gotas de sangre
d. Incubar 72 horas a 37C en CO2
3. COSECHAR
e. A los cubos incubados 72 horas se le agrega 0.1 ml de colcemide incubar durante 1 hora a 37 grados en CO2
f. Centrifugar durante 10 minutos a 1,500 rpm
g. Desechar el sobrenadante
h. Agregar 5 ml de solución hipotónica (cloruro de potasio0.075M)
i. Incubar por 20 minutos a 37 grados
j. Agregar de 8-10 gotas de solución fijadora
k. Homogenizar la muestra copletamente
l. Centrifugar 10 minutos a 1,500 rpmm. Decantar el sobrenadante (Dejar 0.5 ml)
n. Agregar 5 ml de solución fijadora
o. Homogenizar la muestra
p. Centrifugar 10 min a 1,500 rpm
q. Repetir desde el punto 9,...