Cariotipo

Cariotipo –Cultivo de linfocitos

Toma de muestra
1. La toma de muestra debe ser en un tubo(tapa verde) con heparina como anticoagulante.
2. Procesar inmediatamente las muestras, de preferencia enlas primeras 48 hrs.
Antes de empezar:
*Realizar la limpieza de la campana.
*Descongelar las alícuotas del medio de cultivo. No agregar la sangre al medio de cultivo frío.
*Preparar la solución deCarnoy (metanol: acido acético: 3:1 y guardar a -20⁰C), colocar la solución hipotónica a 37⁰C.
* Limpiar con etanol al 70% los portaobjetos a utilizar, dejar secar y asegurarse que no queden residuossobre el portaobjetos. Identificar los portaobjetos por número y nombre del paciente.

Cariotipo
1. Agregar 14 gotas de sangre a un tubo cónico con 8 ml de medio de cultivo pBMax y mezclar suavemente.
2.Incubar a 37⁰C por 72 horas.
3. Agregar 7 gotas de colchicina( 1 ng/ml), mezclar e incubar a 37⁰C por 45 minutos.
4. Centrifugar a 12 000 rpm por 10 minutos, se retira el sobrenadante dejando 0.5 mlpor encima del botón celular.
5. Agregar solución hipotónica precalentada (KCl 0.075M) hasta completar 10 ml, resuspender suavemente e incubara 37⁰C por 20 minutos.
6. Centrifugar a 12 000 rpm por 10minutos, se retira el sobrenadante dejando 0.5 ml por encima del botón celular.
7. Agitar vigorosamente el botón celular y agregar solución de Carnoy hasta completar 10 ml.
8. Centrifugar a 12 000 rpmpor 10 minutos, se retira el sobrenadante dejando 0.5 ml por encima del botón celular.
9. Repetir el paso 7 y 8 dos veces o hasta obtener un botón celular limpio.
10. Llevar a 4⁰C por 24 horas.
11.Centrifugar a 12 000 rpm por 10 minutos, se retira el sobrenadante dejando 0.5 ml por encima del botón celular.
12. El goteo se realiza resuspendiendo el botón celular en 1 ml de sobrenadante, una vezresuspendido el botón se dejan caer 1 o 2 gotas sobre el portaobjetos se dejan secar y se madura por 20 días.
13. Continuar con la técnica de bandas.


Técnica de bandas- Bandas G

Antes de...