Carotenoides

Tema: METODOLOGIA PARA EXTRACCIÓN DE CAROTINOIDES E IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

Objetivo: Extraer carotinoides e identificar por cromatografía de capa fina

ObjetivosEspecíficos:
Conocer la técnica y procedimientos básicos para la extracción de carotenoides a través del método de Söxleth.

Utilizar el método de cromatografía de capa fina para la identificación de loscarotenos y calcular Rf.

Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, (C.C.F), sus características y los factores que en ella intervienen.

METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
a.- Materiales

b.-Equipos  Equipo Söxleth  Rotavapor  Cocineta c.- Reactivos y Sustancias.      Metanol Agua destilada Éter de petróleo Silica gel Benceno

              

Bisturí Probeta 10,50ml 3 matraces erlenmeyer de 250ml 1 agitador de vidrio 1 espátula Pinzas de 3 dedos Soporte universal Vidrio reloj Placa Papel filtro Frasco cámara 3 vasos de precipitados de 150ml Embudo de separaciónPipeta pasteur Vial ámbar

Material biológico  20 g de zanahoria

d.- Procedimiento. EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE CAROTENOS 1. Picar 20 gramos de zanahoria debe estar perfectamente seca (Fig.1),extraer los carotenoides mediante extracción Söxleth, y reflujar con 25 ml de metanol.(Fig.2)

Fig.1

Fig.2

2. Seguidamente realizamos una Extracción liquido-liquido, con la solución obtenidaen el paso anterior, a la cual se le añade 25ml de éter de petróleo (Fig.3), agitar la solución (Fig.4) y permitir reposo para lograr separar los carotenoides (capa superior) y xantofilas (capainferior). (Fig.5)

Fig.3

Fig.4

Fig.5

3. Guardar la capa superior.(Fig.6)

Fig.6

4. Volver la capa inferior al embudo y lavar con 2 porciones sucesivas de 10 ml c\u de éter de petróleo.(Fig.7)

Fig.7

5. Combinar los extractos de éter de petróleo.(Fig.8)

6. Evaporar el éter de petróleo calentando a menos Fig.8 de 40° C usando al vacío (manipule con cuidado). (Fig.9)

Fig.9...