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Introducción
El estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolecula requiere la utilización de técnicas analíticas que permitan su determinación cualitativa y cuantitativa, asi como su caracterización físico-quimica y biológica. Uno de los métodos mas sencillos, accesibles, utiles y utilizados es la espectrofotometría, en general, y la espectrofotometría ultravioleta-visible, en particular. Sepueden identificar y cuantificar biomoleculas en solución y en muestras biológicas, con el empleo
De reactivos especificos que reaccionan con el compuesto a anlizar y forman un producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas.
El fundamento de la espectrofotometria se debe a la capacidad de las moleculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectroUV-visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molecula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atomica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dialéctrica), por lo que dicha tecnica constituye un valioso instrumento para la determinación y caracterización de biomoléculas.
Cuando la luz es absorbida por unamolecula se origina un salto desde un estado energético basal o fundamental, E1, a un estado mayor energía (estado exitado, E2. Y solo se absorbera la enrgía que permita que permita el salto exitado. Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una molecula esto es, su espectro de absorcíon constituye una seña de identidad de la misma.

En espectroscopia el terminoluz no solo se aplica a forma visible de radiacíon electromagnetica, sino tambien de las formas UV e IR, que son invisbles. En espectrofotometria de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano 195 a 400 nm) y el visible (400-780 nm).


La región UV se define como el rango de longitudes de onda a 195 a 400 nm. Es una región de energía muy alta. Los compuestos con doblesenlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptidicos, sistemas aromaticos, grupos carbonilos y otros heteroatomos tienen su máxima absorbancia en la región UV, por lo que esta es muy importante para la determinación cualitativa y cuantitativa de los compuesto organicos. Diversos factores como pH, concentración de la sal y el disolvente que alteran la carga de las moléculas, provocandesplazamientosde los espectros UV.
La fuente de radiacíon ultravioleta es una lámpara de deuterio.
La región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el complementario del color que transmite.
Por tanto, para realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la queabsorbe luz la solución coloreada.
Transmitancia y Absorbancia
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad I0 incide perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe luz cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación incidente Ia y dejara pasar el resto It, de forma que se cumple I0 – Ia + It .





La transmitancia (T) deuna sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra It, y la cantidad de luz que incidió sobre ella, I0 y se representa normalmente en tanto por ciento . la transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la concentraciónno es lineal, pero asume una relación logarítmica inversa.
La absorbancia (A) es un concepto mas relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logarito de 1/T, en consecuencia .
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales, la trasmitancia es de 100% e indica que la muetra no absorbe a una determinada longitud de...